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- 保存条件：
-15℃以下，避光防潮
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Cell Meter™ Intracellular NADH/NADPH Flow Cytometric Analysis Kit *Deep Red Fluorescence*
- 库存：
1
- 供应商：
西安百萤生物科技有限公司
Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 深红色荧光
| 货号 | 15296 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 100 Tests | ||
| Em (nm) | 655 | ||
| 分子量 | 溶剂 | ||
简要概述
Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是一种用于在活细胞或固定细胞中，通过荧光显微镜实时、定量检测细胞内NADH和NADPH总水平的强大工具。细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平升高与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，检测细胞内NAD具有挑战性。（P）H在生物系统中。Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测远光谱活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，可与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。JJ1902 NAD（P）H探针是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD（P）H探针可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用APC通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。
实验样品示例
概述
1.准备细胞（0.5 - 1×106细胞/ mL）
2.将含有测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针的细胞在37℃孵育20-30分钟
3.洗涤细胞并重悬于检测缓冲液
4.使用流式细胞仪APC通道进行分析
注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。
操作方法
1.每个样品，准备0.5 mL无血清培养基或自选缓冲液，细胞密度调整为1×105至1×106个细胞/mL
注：需针对不同细胞系优化最佳细胞密度。贴壁细胞建议使用0.5 mM EDTA轻柔消化以保持细胞完整性，并用无血清培养基洗涤一次。
注：JJ1902 NAD(P)H在含血清条件下仍适用，但建议对不同细胞系进行条件优化。
2.将细胞与测试化合物在37℃孵育所需的一段时间以刺激细胞内NADH / NADPH。
注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型和使用的测试化合物。 优化每个实验的孵育时间。
3.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL JJ1902 NAD(P)H传感器（组分A），37℃孵育30-60分钟
注意：NADH/NADPH阳性对照设置：Jurkat细胞在无血清培养基中用100 µM NADH或NADPH预处理30分钟后，与JJ1902工作液共孵育30分钟（详见结果图1）。
4.用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在分析缓冲液（组分B）中。
5.使用流式细胞仪APC通道检测荧光强度
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文献和实验，第四个结果就有用ELISA检测胞内VEGF的报道。 http://www.nature.com/leu/journal/v17/n10/full/2403084a.html For intracellular levels of VEGF, 5x 106 cells from each cell line were washed in RPMI x2, snap frozen in liquid nitrogen, and then thawed at 37°C
、溶酶体与疾病 各类贮积症 台-萨氏综合征（Tay-Sachs diesease）：溶酶体缺少氨基已糖酯酶A，导致神经节甘脂GM2积累。 II型糖原累积病（Pompe病）：缺乏α-1,4-葡萄糖苷酶，糖原在溶酶体中积累。 Gaucher病：缺乏β- 葡萄糖苷酶，葡糖脑苷脂沉积。 细胞内含物病（inclusion-cell disease）：N-乙酰葡糖胺磷酸转移酶单基因突变。高尔基体中加工的溶酶体前酶上不能形成M6P分选信号，病人成纤维细胞的溶酶体中没有水解酶，底物在溶酶体中贮积，形成
The MTT Cell Proliferation Assay
proliferation. The yellow tetrazolium MTT (3-(4, 5-dimethylthiazolyl-2)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide) is reduced by metabolically active cells, in part by the action of dehydrogenase enzymes, to generate reducing equivalents such as NADH and NADPH
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