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胞内NADH / NADPH流
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西安百萤生物科技有限公司
Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒,细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常,氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢,糖酵解,三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD(P)H水平的增加与活性氧(ROS)和DNA损伤的异常产生有关。然而,由于缺乏敏感的NAD(P)H探针,在生物系统中检测细胞内NAD(P)H具有挑战性。 Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NAD(P)H水平的有效方法。 JZL1707 NAD(P)H传感器是一种优秀的荧光探针,用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JZL1707 NAD(P)H传感器可以很容易地加载到活细胞中,并且可以使用PE通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。
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实验示例
概述
1.准备细胞(0.5-1×106细胞/ mL)2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD(P)H传感器在37ºC下孵育30-60分钟3.洗涤细胞并将其保存在测定缓冲液中4.使用PE通道通过流式细胞仪分析细胞
操作步骤
1.对于每个样品,在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中以1×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意:应单独评估每个细胞系,以确定最佳细胞密度。对于粘附细胞,用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并用无血清培养基洗涤细胞一次。注意:JZL1707 NAD(P)H传感器对血清敏感,因此建议将细胞保存在您选择的无血清培养基或缓冲液中。或者,可以制备细胞并在常规完全培养基中处理。与JZL1707 NAD(P)H Sensor孵育时,请更改为无血清培养基或您选择的缓冲液。在37ºC下将细胞与测试化合物一起孵育所需的时间,以刺激细胞内的NADH / NADPH。注意:适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。
2.将1 µL JZL1707 NAD(P)H传感器(组分A)加入0.5 mL细胞悬液中。在37ºC下孵育30-60分钟。注意:对于NADH / NADPH阳性对照处理:将Jurkat细胞与100 µM NADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟,然后与JZL1707 NAD(P)H Sensor工作溶液在37ºC共同孵育30分钟。分钟。有关详细信息,请参见图1。
3.用所需的缓冲液洗涤细胞一次。将细胞保存在测定缓冲液(组分B)中。
4.使用流式细胞仪监测PE通道的荧光强度。
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