Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素

嘌呤霉素 puromycin

由白黑链霉菌（ Streptomyces alboniger）的培养滤液中获得的抗菌素，除对所有细菌具抗性外，还具有抗肿瘤活性。由于其结构与 tRNA的末端结构类似，故能抑制细菌及真核细胞的蛋白质合成。常作为实验用药。它作用于结合在核糖核蛋白体上相应部位的肽酰 tRNA，可使肽酰嘌呤霉素从核糖核蛋白体上游离出来。  

嘌呤霉素(puromycin)

嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构, 能够同氨基酸结合，代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合，并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。  

CRISPR 技术进行细胞 TP53 基因敲除

：pCas9/gRNA1 载体本身不带筛选标签。我们用带有嘌呤霉素和 EGFP 标签的载体 pLV-EGFP（2A)puro 和 pCas9/gRNA1 载体共转染，再用嘌呤霉素筛选转染成功的细胞。 简要步骤 设计靶点→构建 pCas9/gRNA1 载体→pTYNE 验证靶点→pCas9/gRNA1 载体转染 293T 细胞→挑选培养细胞克隆→测序验证基因敲除 靶点设计和基因敲除载体构建 人 TP53 基因有多个 mRNA 和蛋白拷贝，2 个转录起始位点，以及多个