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- 派真生物提供高效、快速、稳定、可靠的AAV病毒产品。
- 广州市
- 2026年05月02日
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派真生物
- 服务名称：
病毒包装服务
AAV-CRISPR基因编辑
派真生物载体克隆提供基因编辑CRISPR系列载体定制，AAV-CRISPR载体的敲除、修复共分为4种类别，分别是SpCas9/SpCas9HF（A、B系列）、SaCas9/ SaCas9HF（C、D系列）、AAV-CRISPR基因激活（E系列）、NmCas9, AsCpf1, LbCpf1（F、G、H系列），专门用于基因编辑动物体内实验。
基本描述
客户只需要提供sgRNA靶基因序列和选择派真生物载体库编号，由派真生物进行靶点设计、图谱制作和载体构建，若gRNA未经有效性验证，建议多选择2-3个候选靶点。
SpCas9/SpCas9HF（A、B系列）
SpCas9是第一个被鉴定的CIRSPR核酸酶，其PAM为NGG，PAM序列在基因中出现的频率，大约每8bp出现一次，基因长达4.2Kb（详细介绍请参阅AAV-CRISPR系统，第18页）。派真生物以小于300 bp的EFS（EF1a短版本）启动子或miniCMV启动子（180 bp）驱动SpCas9，使序列总长度不超过 AAV长度限制 5Kb。
特点
- 使用经过优化的sgRNA scaffold，能提高切割效率约40%SpCas9HF: SpCas9高保真度版本，大大减小脱靶现象，切割活性与野生型相比无显著降低；
- XA01为SpCas9及sgRNA表达盒处在同一载体的一体化载体。使用比U6启动子更小但活性并无显著减弱的H1启动子(100 bp)，因此能将sgRNA的表达盒与SpCas9放入同一载体；
- XA02为无sgRNA表达盒的单独SpCas9载体，可根据需要置换EFS启动子成410 bp以下的启动子；
- XA03~XA27为U6-sgRNA表达盒，带有EFS或EF1或CAG启动子驱动的mCherry、Cre、mCherry-2A-Cre、RenillaLuciferase-2A-Cre、ZsGreen、EGFP、EGFP-KASH。
SaCas9/ SaCas9HF（C、D系列）
SaCas9是活性与SpCas9相似的短版本Cas9，基因长度为3.2kb，因为有更严谨的PAM (NNGRRT)，PAM序列在基因中出现的频率，大约每32bp中出现一次，靶序列的长度为21nt-23nt，理论上脱靶率比SpCas9更低。
特点
- 使用了经优化的sgRNA scaffold, 显著提高切割效率；
- C1/D1为CMV启动子的SaCas9HF与sgRNA表达盒一体化载体；
- C2/D2/C2XX/D2XX为无sgRNA表达盒的单独SaCas9/SaCas9HF载体，可根据实验设计需要搭配不同的载体使用。
AAV-CRISPR基因激活（E系列）
在14-16 nt的短RNA指导下，野生型SpCas9能结合到靶序列DNA上但不能切割与释放。此时，经过改造加入形成MS2 RNA接头的sgRNA骨架能结合MS2-P65-HSF1 转录激活成分，从而激活下游位置的基因转录。激活基因的转录水平能达1000倍以上。
NmCas9 是跟SpCas9有相似活性的短版本Cas9，基因长度为3.3kb，由于识别更长的PAM（NNNNGATT），PAM序列在基因中出现的频率，大约每128 bp中出现一次，靶序列长度为（21-23 nt)，理论脱靶率比SpCas9低得多，AsCpf1、LbCpf1拥有与 CRISPR-Cas9不一样的特性：（1）更短小的sgRNA骨架（2）识别含T量高的5’PAM（3）靶标DNA被切于远离PAM的位置，且产生5个碱基突出的粘末端。
*如需其他类型启动子或骨架定制，请联系技术支持。
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文献和实验学霸精选：基因编辑实验原理视频： 光遗传 基因编辑是近年来发展起来的可以对基因组完成精确修饰的一种技术，可完成基因定点InDel突变、敲入、多位点同时突变和小片段的删失等。目前，基因组编辑有三大技术：CRISPR/Cas9、TALEN和ZFN。与传统的TALEN和ZFN技术相比，CRISPR/Cas9系统更便捷、高效，应用也更广泛，目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确修饰。 视频 本视频来自互联网
在最新出版（2016.02）的冷泉港实验指南的头版，详细阐述了 CRISPR-Cas9 系统在小鼠基因编辑中应用。 在现代生物学中，实现对小鼠基因进行编辑或许是最重要的进步之一。然而，传统基因工程手段都很费时费力。可编程核酸酶的使用极大的提高了基因编辑技术的准确性（如，锌指核酸酶、转录激活效应核酸酶），但是这些核酸酶的设计和使用仍然纷繁复杂成本高昂。随着下一代可编程核酸酶系列--CRISPR-Cas9 系统的出现，使得基因编辑的能力更加高效准确，与此同时，该系统所涉及的试剂
Cell Rep：上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统
CRISPR-Cas 系统是目前最常用的基因编辑工具，但是由于传统的 Cas 核酸酶分子量普遍太大，使其在在体基因治疗的应用中受限。近年来，为了解决这一难题，小的 Cas 核酸酶逐渐被发现和探究。其中，Cas12f 核酸酶是目前最紧凑的 CRISPR 效应核酸酶，比传统 Cas9 和 Cas12a 核酸酶小一半以上，在临床治疗应用中具有巨大潜力，然而高效的 Cas12f 基因编辑系统仍旧较少。 2022 年 9 月 27 日，上海科技大学季泉江教授团队在 Cell Reports 发表
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