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LacZ基因胞外表达显色试剂盒
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一年
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上海信裕生物科技有限公司
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文献和实验型信息可以判断目的质粒是否可以使用这个感受态细胞来进行扩增,以及是否可以进行目的实验。例如 DH5α基因型:F-, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi-1, gyrA96 , relA1。基因型信息中有 lacZΔM15,说明其表达产物可以与 PUC 质粒编码表达的β-半乳糖苷酶的α肽段实现α互补,因此可以选择用 DH5α感受态来扩增
2)。 图2 使用BLOCK-iT™ Complete Dicer RNAi Kit得到>80%的靶定基因阻断 经Dicer酶切的,来源于β-半乳糖苷酶或者荧光素酶的dsRNA产生siRNA(d-siRNA)库,用来确定d-siRNA特异阻断基因活性的效果。GripTite™ 293 MSR 细胞共转染pcDNA™1.2/V5-GW/lacZ阳性对照质粒和pcDNA™5/FRT/luc,分别独自表达β-gal或者荧光素酶报告子,或者50ng luc 或者lacZ d-siRNA。对于每一种报告子
本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选,宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉(lacZΔΜ15)。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白,可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株,如BL21(DE3)。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时(>7-8 kb),经转化
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