- ￥298 - 498
- 信裕生物
- XY0930
- 中国
- 2025年07月15日
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- 文献和实验
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大量
- 英文名：
2.5M 3-AT solution
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 保存条件：
-20°C
中文名:2.5M 3-AT溶液(过滤除菌)
英文名:2.5M 3-AT solution
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:-20°C
产品简介保存条件：-20 ℃储存，有效期24个月。
产品简介：
HIS2作为报告基因时，会有一定程度的泄漏性表达，出现背景过高的现象，一般称作自激活。这时可以在筛选培养基中加入适量的HIS2竞争性抑制剂3-AT（3-amino-1,2,4-triazole），以降低背景；或者增加一个筛选标记Ade来进行更加严格的筛选。加入的3-AT浓度过高，蛋白间比较弱的相互作用也可能被抑制，因此需要筛选确定3-AT的最适浓度。
信裕生物的3-AT溶液为经过过滤除菌的即用型母液，用于酵母杂交实验抑制本底表达，用以准确筛选出蛋白互作引发的His的报告基因的表达。
使用方法：
1.计算所需平板的数量，计算配置培养基体积；
2.设置3-AT的浓度梯度（建议10-50 mM 的浓度范围设3-5个梯度，常用浓度约30 mM）；
3.灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55 ℃左右，加入3-AT母液，摇匀后倒板；
4.标记每个平板的3-AT浓度，超净台冷却凝胶后，按单位面积单个克隆计算培养物浓度，涂板；
5.28-30 ℃培养3-5天，筛选出最佳3-AT浓度，用于后期互做筛选。
注意：
1.理想情况10 mM浓度的3-AT平板会有少量生长，20 mM浓度的3-AT不能或极少生长。如果在80 mM浓度的3-AT平板上生长酵母，说明自激活活性太高，不能用于双杂交筛选。
2.诱饵蛋白能够单独激活报告基因的表达，该蛋白如果是具有转录激活域一个转录因子，需要去掉转录激活结构域。如果不是转录因子但仍具有较强的转录激活活性，需要将诱饵蛋白具有激活活性的区域去除，但这样操作有可能影响蛋白间的互作。
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文献和实验问：最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道怎么操作，还需要什么辅助设备？答：你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！答：如果溶液的量比较大，超过500ml，可以采用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后，过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。如果用小量
积的95%，轻微搅拌溶解。 3）加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。 4）轻微搅拌溶解，加注射用水至规定体积。 5）用1mol/L 氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。 6）用0.22μm滤膜正压过滤除菌。 7）溶液应在2℃～8℃下避光保存。 具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。 （2） 配制可高压灭菌细胞培养基 1)根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95%，轻微搅拌溶解
AcO- --- part one --- (AcO)2 Ca 1; 1.5M AcOK 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8M (AcO)2 Mg 1M AcONa 1; 2; 3; 4M pH of Ac K/Na
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