Interleukin 6Rα/IL-6Rα mRNA原位杂

注意事项：
Interleukin 6Rα/IL-6Rα mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

产品名称	Interleukin 6Rα/IL-6Rα mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格	100T/盒
货号	XG-Y7100

产品名称  Interleukin 6Rα/IL-6Rα mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格   100T/盒
特异性 人、大鼠、小鼠    
标记方式    3’—尾段标记
保存条件    4°C保存一年
试剂盒内容  1.Interleukin 6Rα/IL-6Rα 寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
准备工作：
产品仅供科研固定液：4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
特点：
1. 安全、快速、重复性好；
2. 特异性100%，灵敏度超过90%；
3. 探针性能稳定，低温保存一年以上；
4. 荧光信号强，结果判定直观可靠；
5. 操作简单，定位精准，无实验污染。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
下列是公司正在热销的产品：
Bis(3-ethyl-5-methyl-4-maleimidophenyl)methane  中文名：双(3-乙基-5-甲基-4-马来基苯基)甲烷  分子式：C27H26N2O4    转基因植物NOS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T
Bindone  中文名：双茚二酮  分子式：C18H10O3    转基因植物NOS基因核酸检测试剂盒   48T
Bi-linderone  中文名：  分子式：C34H32O10    转基因植物PAT基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T
Bezafibrate  中文名：苯扎贝特  分子式：C19H20ClNO4    转基因植物PAT基因核酸检测试剂盒   48T              
Betaxolol   中文名：盐酸倍他洛尔  分子式：C18H30ClNO3    转基因植物NPTⅡ基因核酸检测试剂盒   48T
线粒体复合物II蛋白共沉淀分析试剂盒5次  2-Amino-2'-nitrodiphenyl sulfide  中文名：2-氨基-2'-硝基二苯基硫醚  分子式：C12H10N2O2S  度：98.0%
线粒体复合物II蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次  2-Amino-3-methylbenzoic acid  4389-45-1  中文名：2-氨基-3-甲基苯甲酸  分子式：C8H9NO2  度：98.0%   
线粒体复合物III蛋白共沉淀分析试剂盒5次  2-Amino-4-methylbenzothiazole  1477-42-5  中文名：2-氨基-4-甲基苯并噻唑  分子式：C8H8N2S  度：98.0%   
线粒体复合物III蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次  2-Amino-5-nitrobenzophenone  中文名：2-氨基-5-硝基二苯甲酮  分子式：C13H10N2O3  度：98.0%
线粒体促凋亡蛋白 (SMAC)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Atrazine  1912-24-9  中文名：阿特拉津  分子式：C8H14ClN5  度：98.0%  关键词：
Precursor of cefcapene diisopropylanmine salt  153012-37-4  中文名：  分子式：C28H42N6O8S2    Aigen of human non small cell lung cancer (LTA) ELISA Kit 人非小细胞肺癌抗原(LTA)ELISA试剂盒
Cefcapene pivoxil   147816-24-8  中文名：盐酸头孢卡品酯  分子式：C23H32ClN5O9S2    rabbitEsadiol,E2ELISAKit 兔子雌二醇(E2)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Baclofen  1134-47-0  中文名：巴氯芬  分子式：C10H12ClNO2    CLIAKitforBeta2-GP1AbIgM(HumanBeta2-Glycoprotein1AibodyIgM)ELISAKit人β2糖蛋白1抗体IgM规格：48T/96T
1-(4-(3-Chloropropoxy)-3-methoxyphenyl)ethanone  58113-30-7  中文名：  分子式：C12H15ClO3    细菌营养肉汤500毫升
Nifuroxazide  965-52-6  中文名：硝呋酚  分子式：C12H9N3O5    rabbitEndothelin1,ET-1ELISAKit兔子内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Interleukin 6Rα/IL-6Rα mRNA原位杂交试剂盒100T/盒猪皮质醇(Coisol)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12 
猪皮质/上腺(CO)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Spongouridine  中文名：阿糖尿苷  分子式：C9H12N2O6  度：98.0%
猪皮质/上腺(CO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12  度：%
猪疱疹病毒(PHV)核酸检测试剂盒   48T  Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16  度：98.0%
猪内源性逆转录病毒前病毒(PERV-pre)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Stanolone  中文名：雄诺龙  分子式：C19H30O2