miRNA cDNA第一链合成试剂盒

产品简介：

中文名称：miRNA cDNA第一链合成试剂盒
英文名称：miRNA first-strand cDN Asynthesis kit 
产品规格：25次
产品货期：1-2天
产品运输：低温运输
产品介绍：合成miRNA的第一链cDNA



产品及特点：

增强型 miRNA 第一链合成试剂盒本试剂盒采用 Poly(A)加尾法原理， 首先 miRNA 3’末端加 Poly(A)尾，再使用 Anchored oligo(dT)-universal tag 通用逆 转录引物进行逆转录反应，最终生成 miRNA 对应的 cDNA 第一链。本试剂盒采用 特殊优化预混合 mix 将 Poly(A)加尾和反转录合并为一步完成，简化了操作步骤并 提高 Poly(A)加尾和逆转录效率， 该试剂盒具有可从 20pg-2μg 的 Total RNA 中 有效制备 miRNA 对应的 cDNA 第一链。一次合成的 cDNA 可检测多个 microRNA，节约了样品和成本。



规格及成分：
 

成 份	大纸盒包装
E.coli Poly(A) Polymerase(5U/μl)	50U
TRUEscript Hˉ RTase (200U/μl)	5000 U
2 × miRT Reaction Mix	250 μL
RNase free H2O	1 mL
使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20 ℃保存，保质期一年。

本产品仅供科研



使用方法：

一、miRNA 3’末端进行 Poly (A)加尾和逆转录反应（第一链合成）
1. 加入以下试剂至总体积 20μl (最后加入 E.coli Poly(A) Polymerase 和 TRUEscript Hˉ RTase）
 

Components	Volume	Final Concentration
Total RNA	x μl	Up to 2μg
2 × miRT Reaction Mix	10 μl	1 ×
E.coliPoly(A) Polymerase(5U/μl)	0.3-0.4 μl(见注意事项)	2U
TRUEscript HˉRTase(200U/μl)	0.8-1μl (见注意事项)	200U
RNase free H2O to final volume	20 μl

2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在 42℃反应 60 min。
3. 85℃加热5秒钟失活E.coli Poly(A) Polymerase 和 TRUEscript Hˉ RTase。合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存；也可以直接进行下游PCR或 者荧光定量PCR检测。

二、按照miRNA Real-Time PCR Assay kit进行real time PCR。
注：按照上述操作步骤得到的cDNA模板用于下游PCR或者荧光定量PCR检测时， 可以根据实际情况选择使用量，对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导 致非特异性扩增，可根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（5-10倍或者100 倍）后使用。如果发现有非特异扩增条带，或者融链曲线显示有非特异扩增，往往 提示cDNA模板过量， 可以尝试将上述cDNA模板稀释几十到几百倍甚至上千倍再 使用。