手机验证
40005
Amplite® Fluorimetric Glucose Quantitation Kit
Amplite荧光法葡萄糖定量试剂盒
Amplite® Fluorimetric Glucose Quantitation Kit
Amplite荧光法葡萄糖定量试剂盒
500T
适用仪器
荧光酶标仪 | |
Ex: | 540nm |
Em: | 590nm |
cutoff: | 570nm |
推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
准备并添加葡萄糖标准品和/或测试样品(50μL)
准备并添加葡萄糖分析工作溶液(50μL)
在37°C孵育10-30分钟
在Ex / Em = 540 / 590nm处检测荧光强度
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite 红色储备液(250X):
将100μLDMSO(组分E)加入到Amplite Red底物(组分A)的小瓶中。应立即使用原液。任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。注意:避免反复冻融循环。注意:在硫醇如二硫苏糖醇(DTT)和2-巯 基 乙 醇存在下,Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯 基乙 醇的浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH(> 8.5)下也不稳定。因此,反应应在pH 7-8下进行。建议使用提供的分析缓冲液(pH 7.4)。
1.2辣根过氧化物酶(HRP)储备液(10 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入到辣根过氧化物酶(组分C)的小瓶中。注意:未使用的HRP溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。
1.3葡萄糖氧化酶溶液(100 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入葡萄糖氧化酶(组分D)的小瓶中。注意:未使用的葡萄糖氧化酶溶液应分为一次性等分试样并储存在-20℃。
1.4葡萄糖原液(800mM):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入葡萄糖小瓶(组分F)中。注意:未使用的葡萄糖溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20℃。
2.标准溶液配制
2.1葡萄糖标准溶液配制
通过将适量的800mM葡萄糖储备溶液稀释到测定缓冲液(组分B)中来制备葡萄糖标准品,以产生30μM的葡萄糖浓度。 然后在测定缓冲液(组分B)中进行1:3连续稀释,得到约10,3,1,0.3,0.1和0.03μM连续稀释的葡萄糖标准品。 包括非葡萄糖缓冲液对照作为空白对照。
3.工作溶液配制
表1.一个透明底96孔微孔板的分析工作溶液(2X)
组分 | 容积 |
Amplite 红色储备液(250x) | 20ul |
HRP储备液(10 U / mL) | 100ul |
葡萄糖氧化酶溶液(100 U / mL) | 100ul |
分析缓冲液 | 4.78ml |
总容积 | 5ml |
操作步骤
表2.固体黑色96孔微孔板中葡萄糖标准品和测试样品的布局。
GS =葡萄糖标准品(GS1-GS7); BL =空白对照; TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
GS1 | GS1 | ... | ... |
GS2 | GS2 | ... | ... |
GS3 | GS3 | ||
GS4 | GS4 | ||
GS5 | GS5 | ||
GS6 | GS6 | ||
GS7 | GS7 |
表3.每个孔的试剂组成
葡萄糖标准溶液 | 空白对照 | 测试样品 |
连续稀释:50μL | 测定缓冲液(化合物B):50μL | 50ul |
注意:由于Amplite 红色底物(对非荧光产物)的过氧化,高浓度的葡萄糖(例如测试样品或标准品中的100μM)可能导致荧光信号减少。
葡萄糖测定
1.如表2和3中所述,将葡萄糖标准品和含葡萄糖的测试样品加入96孔黑色微孔板中。
2.将50μL葡萄糖测定工作溶液添加到葡萄糖标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(表2),以使总葡萄糖测定体积为100μL/孔。 注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。
3.将反应在37℃孵育10至30分钟,避光。
4.用荧光板读数器在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm(Ex / Em = 540 / 590nm)监测荧光强度。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
参考文献
Glucose metabolism ontogenesis in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in the light of the recently sequenced genome: new tools for intermediary metabolism programming
Authors: Lucie Marandel, Vincent Véron, Anne Surget, Elisabeth Plagnes-Juan, Stéphane Panserat
Journal: Journal of Experimental Biology (2016): 734--743
High glucose potentiates L-FABP mediated fibrate induction of PPARα in mouse hepatocytes
Authors: Anca D Petrescu, Avery L McIntosh, Stephen M Storey, Huan Huang, Gregory G Martin, Danilo Landrock, Ann B Kier, Friedhelm Schroeder
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2013): 1412--1425