NR8383大鼠肺泡巨噬细胞丨NR8383细胞株丨逸漠(im

细胞介绍

NR8383 (正常大鼠，1983年)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解;分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重复地响应外源生长因子。

NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TGF-β前体。在博莱霉素刺激下，TGF –β mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10 钠克/毫升的LPS水平抑制增生达50%。 即使达到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性。

细胞特性

1) 来源：肺;巨噬细胞

2) 形态：巨噬细胞，半悬浮生长

3) 含量：>1x106 个/mL

4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

(1)干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

(2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

(3)收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞接收后的处理：

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，(10×，20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4) 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。

5) 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。

6)备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞培养操作规程，供参考

一.培养基及培养冻存条件准备

1)准备F-12K培养基;优质胎牛血清15%;L-谷氨酰胺，2mM;双抗，1%。细胞是贴壁和悬浮混合培养。

2)培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二. 细胞处理

1) 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。

2) 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1. 将上清取出保留，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出，和上清一起在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。第一次传代最好为1:2。

下面T25瓶为类

1，细胞冻存时，取出上清，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。