THP-1/THP-1人单核细胞白血病细胞/STR图谱鉴定

THP-1人单核细胞白血病细胞
一、细胞介绍

该细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。

二、细胞特性

1) 来源：急性单核细胞白血病，单核细胞

2) 形态：单核细胞，悬浮

3) 含量：>1x106

4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

三、运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

(1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;

(2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

(3)收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

四、细胞接收后的处理

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，(10×，20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4) 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。

5) 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。

6)备注：T25培养瓶运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

五、细胞培养步骤

1.培养基及培养冻存条件准备

1)准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清，10%;0.05 mM β-巯基乙醇;双抗，1%。

2)参考传代比例：传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

3)参考换液频率：传代时换液

4)培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

5)冻存液：完全培养液95%，DMSO 5%(使用该冻存液后，按照我库的经验复苏存活率约50%，复苏后需要额外培养7-10天才能恢复生长)

6)注意事项

a) 该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。同时，您在收到细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以直接向培养瓶中添加等体积的新鲜培养液，然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。

b)细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。

c)该细胞的培养液中需添加β-巯基乙醇(细胞培养级别，可参考细胞说明书中的品牌、货号)，若不添加，可能会对细胞状态造成影响。

d)该细胞对细胞密度较为敏感，培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围(具体请参考细胞说明书)。

e)该细胞冻存后复苏率较低，冻存时请酌情提高细胞量

ATCC有关thp-1细胞保持细胞活力的说明

https://www.atcc.org/support/faqs/2ed94/Seeding%20density%20for%20TIB-202.aspx?device=modal

(thp-1悬浮细胞。这些细胞更喜欢条件培养基和温和处理，而不是离心和全培养基更换。添加细胞培养基以稀释细胞至维持密度。

频繁的细胞计数是监测thp-1的最佳方法。这些细胞应该每2至3天通过向烧瓶中简单加入少量新鲜培养基(使它们具有条件培养基)来培养。您不需要每次都离心细胞并重新传代。当在我们的实验室中培养时，到第2天，细胞通常可以扩增到具有更多培养基的更大的烧瓶中。当细胞密度达到8×10 5个活细胞/ ml时需要进行传代。不允许细胞密度超过1×10(6)活细胞/ ml。)

六. 细胞处理

1) 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

5)细胞冻存时，取上清，可使用血球计数板计数。

6)4min ，1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入冻存液，轻轻混匀，DMSO终浓度为5%，细胞密度2x106/支，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。