Jurkat，Clone E6-1人T淋巴细胞白血病细胞(含

一、细胞介绍

这是Jurkat-FHCRC细胞株(Jurkat细胞株的衍生)的一个克隆。 Jurkat细胞株来源于一个14岁男孩的外周血。 经佛波酯和外源凝集素或抗T3单克隆抗体(两种类型的诱导都需要)诱导后可产生大量IL-2。

二、细胞特性

1) 来源：T淋巴细胞;急性T细胞白血病

2) 形态：淋巴母细胞,悬浮生长

3) 含量：>1x106 个/mL

4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

三、运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

(1)干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

(2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

(3)收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

四、细胞接收后的处理

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，(10×，20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4) 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。

5) 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。

6)备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

五、细胞培养步骤

1.培养基及培养冻存条件准备

1)准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清，10%; GlutaMAX (Gibco，35050061)，1%;双抗，1%。

参考传代周期：不超过300万细胞/ mL，建议将活细胞密度控制在10万-100万/ mL之间

参考传代密度：10万活细胞/ mL,参考换液频率：2-3天。

2)注意

a)该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。同时，您在收到细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以直接向培养瓶中添加等体积的新鲜培养液，然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。

b)改细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。

c)该细胞对细胞密度较为敏感，培养，传代时请注意保持细胞密度在合适的范围。

3)培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

4) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2. 细胞处理

1) 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)补加到6ml。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法

a. 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。换液可通过添加几毫升新鲜培养基或离心之后去上清液，添加新培养基重悬培养。

2) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类

a.细胞冻存时，取上清，可使用血球计数板计数。

b.4min ，1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。