hep-53.4细胞丨hep-53.4小鼠肝癌细胞（德国引进

产品基本信息

细胞名称：HEP-53.4，小鼠肝癌细胞

种属来源：人

组织来源：肝

细胞形态：成上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:： DMEM(含 NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周2-3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

注意:HEP-53.4细胞在 DMEM(含 1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的 DMEM 含有较高浓度的 NaHCO3(3.7g/L)， 若使用 DMEM(3.7g/L NaHCO3)培养基培养细胞时需要提高 CO2 浓度(7%-10%)。

该细胞贴壁不牢，运输会导致细胞成团飘起，可按以下方法处理：

1. 常规消化收集细胞离心

2. 离心后去掉离心管内上清，加入3ml左右PBS重悬，离心去掉上清后加入 1ml 左右胰酶重悬细胞混匀，建议轻轻晃动或者轻 轻吹打细胞， 放入培养箱消化细胞，再消化 1min 左右。

3. 消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入 3-5ml 含血清的培养基混匀以终止消化，离心去除胰酶

4. 加入 5ml 左右的细胞相应的完全培养基混匀，按比例接入培养瓶/皿中

5.显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单细胞，若有少量成团的小细胞团可不用重新消化，使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。

细胞培养操作

1)复苏细胞：将含有1 mLHEP-53.4细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有HEP-53.4细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将HEP-53.4细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查HEP-53.4细胞密度。

2)细胞传代：如果HEP-53.4细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将HEP-53.4细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使HEP-53.4细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。