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- 文献和实验
- 技术资料
- 抗体名:
DDX4 (2F9H5) Mouse mAb
- 抗体英文名:
DDX4 (2F9H5) Mouse mAb
- 浓度:
1mg/1ml
- 应用范围:
公司产品仅用于科研
- 保质期:
详见说明书
- 目录编号:
FSK12534
- 库存:
100
- 供应商:
上海抚生
- 克隆性:
多克隆
- 保存条件:
Store at -20 °C
- 形态:
详见说明书
- 亚型:
IgG
- 免疫原:
详见说明书
1.材料与试剂
a.提取的动物 Ig
b.弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
c.青霉素和链霉素
d.实验动物 兔
e.其它材料及试剂
2、选择实验活体。
3、进行动物免疫实验。
4、试取血样进行测试,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,杀死实验活体,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。胎牛血清(无菌采制)
ADP(Human adiponectin) ELISA Kit 人脂联素 96T
HIS(Human Histamine) ELISA KIT 人组胺 96T
Human Resistin ELISA KIT 人抵抗素 96T
ALP-B(Human Bone-specific Alkphase B) ELISA Kit 人骨特异性碱性磷酸酶B 96T
OT/BGP(Human Osteocalcin/Bone gla protein) ELISA kit 人骨钙素/骨谷氨酸蛋白 96T
sRANKL(Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand) ELISA Kit 人可溶性核因子κB受体活化因子配基 96T
1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3(Human 1,25-dihydroxyvitamin D3) ELISA Kit 人1,25二羟基维生素D3 96T
Human histon-H2b ELISA Kit 人组蛋白H2b 96T
OPG(Human Osteoprotegerin) ELISA KIT 人骨保护素 96T
BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit 人骨成型蛋白受体Ⅱ 96T
BMPR-1A(Human Bone morphogenetic protein receptor 1A) ELISA Kit 人骨成型蛋白受体1A 96T
BMP-4(Human Bone morphogenetic protein 4) ELISA Ki 人骨成型蛋白4 96T
BMP-2(Human Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit 人骨成型蛋白2 96T
cAMP(Human cyclic adenosine monophosphate) ELISA Kit 人环磷酸腺苷 96T
MASP(Human mannan binding lectin associated serine protease) ELISA Kit 人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶 96T
DDX4 (2F9H5) Mouse mAb100 ulCDK-7(Human Cyclin-dependent kinase 7) ELISA Kit 人周期素依赖性激酶7 96T
CDK-2(Human Cyclin-dependent kinase 2) ELISA Kit 人周期素依赖性激酶2 96T
CDK-1(Human Cyclin-dependent kinase 1) ELISA Kit 人周期素依赖性激酶1 96T
AMPK(Human Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase) ELISA kit 人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶 96T
LDH(Human Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 人乳酸脱氢酶 96T
ADAM9(Human A Disintegrin And Metalloprotease 9) ELISA Kit 人解整合素样金属蛋白酶9 96T
BACE2(Human beta-site APP-cleaving enzyme 2) ELISA Kit 人β位淀粉样前体蛋白裂解酶2 96T
UPP1(Human uridine phosphorylase 1) ELISA Kit 人尿嘧啶核苷磷酸化酶1 96T
ADH(Human alcohol dehydrogenase) ELISA Kit 人乙醇脱氢酶 96T
RND1(Human Rho family GTPase 1) ELISA Kit 人Rho家族GTP酶1 96T
RIPK2(Human receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2) ELISA Kit 人受体TNFRSF结合丝氨酸苏氨酸激酶2 96T
抗体的制备过程:
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
抗原准备:
经常使用的抗原有:偶联多肽、偶联的小分子或化合物、天然或重组蛋白等等。
对可溶性抗原而言,为了增强其免疫原性或改变免疫反应的类型、节约抗原等目的,通常采用加佐剂的方法以刺激机体产生较强的免疫应答。
多克隆抗体和单克隆抗体的区别:
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。而同一种抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。多克隆抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应,有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。
效价测定:采用琼脂扩散法。
⑴ 将血清倍比稀释,加入外周孔。
⑵ 中间孔加动物 Ig。
⑶ 37℃湿盒琼扩24 小时后观察结果。
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文献和实验1. Materials(1) Antibody 7E3, 2L sup grown in flasks, frozen and thawed overnight.(2) BioRad Affi-Gel Protein A MAPS II Buffers cat. #1530-6160 ($161.00)(3) 50 mM Tris pH7.8.(4) 40 g ammonium sulfate for every 100 ml Sup.(5) 4L 100 mM Tris/pH
preparation (serum, tissue culture supernatant, or ascites). Apply Binding buffer again ~ 200 ml. Apply Elution buffer ~ 100 ml. Collect 3 ml fractions in 5 ml tubes with 700 ul 1 M Tris pH 9.0 already in bottom of tube to neutralize
标本。 2. 加20ul 1 N HC I ,盖紧,上下混匀。 2 - 8 ℃ 放置60± 2 分钟。 3. 加20ul 1 N NaOH, 盖紧,上下混匀。 4. 即用,或放-20/-70 ℃ 保存3 天。计算结果时乘 以稀释倍数 50 。 ( 注意:不同的标本E2F1 的水平可能有较大差异,请根据实际情况灵活掌握稀释度) 5. 细胞培养上清或组织匀浆 10 倍稀释 (410ul 的标本
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