Bradford 蛋白浓度测定试剂盒

蛋白定量

产品信息：

本试剂盒有效期为一年

产品简介: 

Bradford 蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一，其实验原理是根据考马斯亮蓝(Coommassie Brilliant Blue)G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精氨酸（Arginine） 在酸性介质中结合后，溶液转变为蓝色，使染料的最大吸收峰从 465nm 迁移到 595nm，且测定的吸光 值与蛋白浓度成正相关关系；即可通过测定蛋白在 595nm 处的吸光度，推算蛋白浓度，进而进行定量测定。 

本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比 Lowry 法大约高四倍，测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。

注意事项： 

1. Bradford 染色液使用前，需将其恢复至室温，有利于提高检测的灵敏度；并在使用前充分混匀

2. 标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用 Beer 定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度；为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔，每次试验都必须建立标准曲线 

3. Bradford 法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂 DTT 的兼容性高达 5mM；但会受到略高浓度的去垢剂影响，需确保 SDS 低于 0.01%，Triton X-100 低于 0.05%，Tween  20/ 60/80 低于 0.015%等 

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

使用说明： 

一．配制 BSA 标准品体系（线性范围 100-1500ug/ml）： 

可参考下表配制不同浓度的标准品梯度 ，并充分混匀，避免气泡生成：

标准品稀释液原则上应与为蛋白样品的溶解液一致，但也可用蒸馏水、生理盐水或 PBS 进行稀释

二. 蛋白浓度测定： 

（1）分别取 5µl 不同浓度蛋白标准品和待测样品加入 96 孔板中；若样品不足，可以用稀释液进行稀释，但须记录样品稀释比例 

（2）各孔加入 200µl G250 染色液，充分振荡混匀，室温孵育 2-3min 

（3）用酶标仪测定 595nm 处的吸光度

（4）以标准蛋白浓度（ug/ml）为横坐标，用 OD 值为纵坐标绘制标准曲线，根据测出的待测样品的 A595 值，即可得出样品的蛋白质浓度，进而进行定量计算

参考标准曲线：