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- D0110
- 2025年11月14日
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大量
- 供应商：
诺博莱德
本公司供应化学试剂的DNA退火缓冲液，品质保证，欢迎洽谈。
简介：本Annealing Buffer可以用于DNA oligo退火，不可用于RNA oligo 的退火。退火后产物可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
操作步骤
1. 把要退火的DNA oligo用经灭菌的三蒸水配制成50μM。解冻Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，混匀备用。如经常使用，本Buffer可放置2-8℃一个月。
2. 如下设置退火反应体系：
| Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) | 20μl |
| DNA oligo A(50μM) | 20μl |
| DNA oligo B(50μM) | 20μl |
| Nuclease-Free Water | 40μl |
| 总体积 | 100μl |
3. 如下设置PCR仪进行退火反应：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 95℃ | 2分钟 | 让oligo充分变性 |
| 2 | 每8秒下降0.1℃，降至25℃(注1) | 约90分钟 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
4. 退火结束后可以直接用于连接反应，也可以在-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，最好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过10%，以避免AnnealingBuffer对后续的酶反应体系的干扰。
| 货号 | 产品名称 | 品牌 | 规格 | 价格（元） |
| D0963 | 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 160.00/1200.00 |
| D0962 | 2×Pfu PCR MasterMix (含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 160.00/1200.00 |
| D0961 | 2×Taq PCR MasterMix (不含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 80.00/580.00 |
| D0960 | 2×Taq PCR MasterMix(含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 80.00/580.00 |
| D0965 | 2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 120.00/1000.00 |
| D0964 | 2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 120.00/1000.00 |
| D0110 | DNA退火缓冲液 | NobleRyder | 5ml | 80.00 |
| D0973 | dNTP(10mM) | NobleRyder | 1ml | 80.00 |
| D0974 | dNTP(2.5mM) | NobleRyder | 1ml | 40.00 |
| D0951 | Pfu DNA Polymerase | NobleRyder | 500U/2500U | 180.00/720.00 |
| D0033 | SYBR Green I(20×)定量PCR用 | NobleRyder | 1ml | 120.00 |
| R0928 | SYBR Green II(10000×) | NobleRyder | 100ul | 520.00 |
| D0950 | Taq DNA Polymerase | NobleRyder | 1000U/5000U | 80.00/320.00 |
| D0952 | Taq Plus DNA Polymerase | NobleRyder | 500U/2500U | 140.00/560.00 |
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文献和实验碘化物缓冲液： 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的？我怎么没有提出DNA来，不知道是为什么？用的是NEB手册上写的方法。1. 按上述方法进行噬菌斑扩增，在第一步离心后，将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。2. 加200 µl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置10 min。3. 离心10 min，弃上清液。4. 短暂离心，小心吸去残余上清。5. 沉淀物彻底重悬于100 µl碘化物缓冲液中
一、实验概要 PCR 扩增目标 DNA 片段。 二、实验原理 多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93℃ 左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 2. 模板 DNA 与引物
多聚酶链式反应( PCR) 是在模板DNA、引物和4 种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖DNA 聚合酶的酶促反应[1 ] 。在实验室日常工作中经常出现两种情况:一种是因未找到最佳扩增条件导致产生大量非特异性产物,另一种情况是未扩增出任何产物。影响PCR 的因素很多,除了受 PCR 仪器性能的制约外,也取决于反应体系和反应条件的设置,其中Mg2+ 浓度、缓冲液pH 值、循环条件等因素尤为重要,而循环条件中的退火温度又是至关重要的因素。降落PCR 是一种设计多循环以使相连循环的退火
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