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本公司供应化学试剂的SYBR Green I(20×)定量PCR用,品质保证,欢迎洽谈
SYBR Green I(20×)定量PCR用
SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。
使用浓度对荧光PCR结果的影响
SYBR Green I荧光定量PCR的试验成功有很多因素,但是SYBR Green I的使用浓度是非常关键的因素,如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出;而在高浓度时,将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度。
我们提供的为20×的浓缩液,使用时可稀释20—100倍,即使反应的终浓度为1×到0.2×之间。
镁离子浓度的影响
提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时,镁离子浓度要比无SYBR Green I 的普通PCR 反应要高出0.5 到3mM。
| 货号 | 产品名称 | 品牌 | 规格 | 价格(元) |
| D0963 | 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料) | NobleRyder | 1ml/10ml | 160.00/1200.00 |
| D0962 | 2×Pfu PCR MasterMix (含染料) | NobleRyder | 1ml/10ml | 160.00/1200.00 |
| D0961 | 2×Taq PCR MasterMix (不含染料) | NobleRyder | 1ml/10ml | 80.00/580.00 |
| D0960 | 2×Taq PCR MasterMix(含染料) | NobleRyder | 1ml/10ml | 80.00/580.00 |
| D0965 | 2×Taq Plus PCR MasterMix (不含染料) | NobleRyder | 1ml/10ml | 120.00/1000.00 |
| D0964 | 2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料) | NobleRyder | 1ml/10ml | 120.00/1000.00 |
| D0110 | DNA退火缓冲液 | NobleRyder | 5ml | 80.00 |
| D0973 | dNTP(10mM) | NobleRyder | 1ml | 80.00 |
| D0974 | dNTP(2.5mM) | NobleRyder | 1ml | 40.00 |
| D0951 | Pfu DNA Polymerase | NobleRyder | 500U/2500U | 180.00/720.00 |
| D0033 | SYBR Green I(20×)定量PCR用 | NobleRyder | 1ml | 120.00 |
| R0928 | SYBR Green II(10000×) | NobleRyder | 100ul | 520.00 |
| D0950 | Taq DNA Polymerase | NobleRyder | 1000U/5000U | 80.00/320.00 |
| D0952 | Taq Plus DNA Polymerase | NobleRyder | 500U/2500U | 140.00/560.00 |
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度,需要摸索,从200nM到700nm等,设置不同浓度。3、每个引物浓度,从well 1到12设置4个样本,阳性cDNA 1和2,NTC以及H2O,做triplicate。4、若用ABI7000或7700,所有的PCR条件可设置成一致的,减少麻烦,当然,引物
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