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- 2025年07月08日
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53
- 英文名：
Band-Now Pre-Staining Protein Sample Treatment Buffer for SDS-PAGE
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
瓶
| 产品名称 | 荧光蛋白上样缓冲液 |
| 英文名称 | Band-Now Pre-Staining Protein Sample Treatment Buffer for SDS-PAGE |
| 货号 | BH-DB6567 |
别名 立显蛋白电泳条带显色剂 蛋白荧光buffer 荧光上样缓冲液
英文名称 Band-Now Pre-Staining Protein Sample Treatment Buffer for SDS-PAGE
储存条件 -20℃
荧光蛋白上样缓冲液在电泳前的样品处理阶段对SDS-PAGE的蛋白样品进行预染，标记上荧光。实验完成以后，凝胶中或转膜后的蛋白条可直接通过紫外灯、LED灯或其他数字成像系统进行观察和分析，无需染色脱色。
荧光蛋白上样缓冲液灵敏度高比银染高。稳定性强，背景低。可对所有蛋白进行染色，不影响蛋白的迁移率与电泳图谱。电泳过程中，游离的染料分子与溴酚蓝的迁移速率一致，跑胶结束时 移至凝胶末端，背景干净。荧光蛋白上样缓冲液非常适合用于追踪蛋白表达纯化以及Western blot的SDS-PAGE。
使用步骤
1 请在使用前根据管壁标签上的体积加入resuspension buffer重悬。Resuspension buffer在4℃可能会有沉淀产生，室温下放置至沉淀消失。
2 将用上样缓冲液处理的蛋白样品与待电泳蛋白样品1:2混合。比如，3ul 上样缓冲液 + 6ul 蛋白样品。
3 90-100℃加热上述处理的样品混合液5分钟。细胞或组织样品，加热时间延长至10分钟。确保加热温度>90℃使样品充分受热。
大部分预制胶（Bis-Tris体系除外）可以直接进行下一步。Bis-Tris体系的预制胶(如Life Technology)，需加入20%已处理样品体积的Enhancing buffer。比如，10ul已处理的样品需加入2ul Enhancing buffer。
4 样品可以上样进行电泳了（无需再加Loading Buffer处理）。
5 电泳结束后，将凝胶放至透射仪上进行观察和拍照。透射仪可以是紫外灯，蓝光LED灯或其它凝胶成像系统。如果光源在可见光波长范畴的无需剥胶，因为可见波长范围内的光可以穿透玻璃或塑料材质的胶板。
6 （可选的）如果有需要，经荧光蛋白上样缓冲液处理的凝胶仍可进行考染。按标准的考染步骤进行即可。
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
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操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验问：新买了GelRed，比较贵，打算用节约的方法来使用，也就是把GelRed预混在上样缓冲液里，和样品混合后上样电泳。因此想请教一下有经验的站友： 1 假定使用6X上样缓冲液，应该以多大比例混合GelRed？ 2 预混GelRed的上样缓冲液与核酸样品混合后，需要孵育一段时间还是可以直接上样？ 3 预混在上样缓冲液中的GelRed是否稳定，是否可以长期存放，以及存放条件是室温，4度
)，构象(例如超螺旋、开环或线性）以确保对迁移进行适当比较(了解更多: 结构和构象对样品迁移性的影响） 片段的数量和适当的分离形式，用于大小的估计 预期用途，如分子量标准是设计用于定性分析还是精确的定量测定 不同类型凝胶适用的分子量标准(例如，部分预制凝胶推荐设计特定分子量标准以获得最佳运行结果) 上样染料的性质，避免目的条带模糊(图 1) 上样缓冲液与使用凝胶的兼容性(例如，缓冲液的盐浓度会影响样品的迁移) 图 1. DNA 分子量标准差异。 分子量标准 #2 由色谱纯化的 DNA 片段组成，存在
以优化其 mRNA 结构，增加翻译效率 4、AAV（带荧光标记）体内感染后检测不到荧光或者荧光弱，可能是什么原因？ 可能的原因 解决方案 病毒滴度过低 重新测定病毒滴度 病毒失效 病毒颗粒在生产、保存或运输过程中可能受损，导致感染效率低或完全失效 检查病毒滴度；体外测试病毒的感染效果；重新包装病毒 对目标组织/细胞的感染效率低 选择组织/细胞特异性 AAV 血清型 荧光蛋白表达的问题 启动子选择不当：如果用于驱动荧光蛋白
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