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膜/玻片芯片
RayBiotech高通量半定量抗体芯片技术平台
RayBiotech掀起蛋白高通量检测热潮,利用RayBiotech抗体芯片,只需20-100μl样品科研工作者6小时内即可检测单个样品中最多达507个蛋白表达水平。这是一场蛋白质研究的革命,必将引领蛋白研究跨入全新的时代。
一、夹心法抗体芯片
夹心法抗体芯片是RayBiotech基于“三明治”双抗体夹心法检测模式建立的芯片。将捕获抗体预先固定在固相载体上,加入生物样品到芯片上进行孵育反应,特异性的抗原与捕获抗体结合,然后加入生物素标记的检测抗体,最后通过HRP-链霉亲和素与化学发光底物或荧光染色剂底物反应来检测信号。夹心法具有很高的灵敏度,检测灵敏度可以低至1-10 pg/mL。这种高通量检测方法可取代western blot或ELISA。
二、标记法抗体芯片
标记法芯片是RayBiotech的L-系列芯片。L-系列芯片只需要一个捕获蛋白,它用生物素标记样品来代替标记检测抗体。这种模式可以检测那些没有合适的抗体对来建立双抗体夹心法检测的分析物。因为溶液中没有自由的检测抗体与其他抗体相互作用产生干扰,那么基于抗体相互作用产生的交叉反应就可以避免,所以引入新的抗体到标记芯片上比较容易,一个芯片上可以有几百个甚至几千个抗体。标记法芯片非常适合于大批量的筛选试验,目前,RayBiotech的标记法抗体芯片最多同时可以检测507种蛋白。
膜式芯片是RayBiotech的C-系列芯片,C-系列芯片是将蛋白质预先固定在硝酸纤维素或者PVDF上,然后膜的封闭、孵育和清洗都和免疫印迹非常相似。膜芯片可以使用化学发光、比色法和红外扫描来检测信号,且灵敏度很高,可以检测蛋白浓度低至pg/mL;膜芯片非常容易操作,且适合于大多的生物医学实验,其最大的优点就
是在不需要任何特殊仪器的情况下都可以进行试验操作。
玻片式芯片平台
玻片式芯片是RayBiotech的G-系列抗体芯片,G-系列芯片是将蛋白质预先固定在标准大小的玻片上,并用一些配件如2、4、16孔的板架、垫圈和搭扣边来形成多通量的芯片。玻片式芯片与膜芯片相比有几大优点:首先,多个阵列在同一个标准大小玻璃片上,通量大大增加;其次,需要样品量更少,是膜芯片的十分之一;第三,它容易自动化,所以一个技术员一天可以进行几十个芯片检测是没有任何困难的。玻片式芯片制作成本较低,价格比膜芯片便宜约20%。一般来说,适合于膜芯片的样品都可以用于玻片式芯片。玻片式芯片需要激光扫描仪来检测荧光信号,几乎所有公司各种类型的扫描仪都可以使用。玻片式芯片荧光信号可维持很长时间甚至几个月,也适用于蛋白浓度的定量分析。
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文献和实验蛋白质芯片技术是继基因芯片技术后发展起来的生物检测技术,是蛋白质组学研究中除了酵母双杂交、双向电泳技术、质谱技术等之外的一种重要的工具。蛋白质芯片技术具有平行、快速、自动化的优点,并且检测到的平行数据误差更 小,更准确,这对于高通量的研究具有非常重要的意义。它的出现对于生物学、临床检验医学、遗传学、肿瘤学等多学科的进步具有极大的推动作用。蛋白质芯片技术根据芯片上固定的物质不同又分为抗体芯片与蛋白芯片。 近几年来,随着抗体技术的发展,抗体库的建设速度越来越快,生产了大量优质的抗体
激光扫描仪例如Axon GenePix扫描信号, 采用Cy3或者绿色通道(激发频率=532nm) 2.3.9 采用RayBiotech 配套的数据分析软件来进行数据分析。 3、实验注意事项 3.1 玻片的操作 3.1.1 不能触摸玻片的表面,因为玻片芯片非常灵敏,只能接触玻片的边缘; 3.1.2 操作实验时候,请戴上橡胶手套(不掉粉末),以免污染试剂和玻片; 3.1.3 避免打碎玻片 3.1.4 保持
试剂盒里有缓冲液、检测抗体、和带有捕获抗体的膜,这些捕获抗体经过精心选择,有高度特异性,它们在硝酸纤维素膜上重复点样两次。经多项研究证实,蛋白芯片能简化鉴定蛋白所需的筛选过程。通过监控蛋白水平和一些蛋白翻译后修饰的变化,能迅速靶定目标分子,以便进一步的研究。 二、R&D Systems蛋白芯片及其原理试验操作步骤简单介绍 以“检测人的特定位点42种受体酪氨酸激酶(RTKs)的相对磷酸化水平”的Proteome Profiler Phospho-RTK Antibody Array(货号
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