脂质体核酸转染试剂说明书

【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：脂质体核酸转染试剂说明书
英文名称：Liposome nucleic acid transfection reagent
产品规格：0.5ml
发货周期：1～3天
脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
以无菌的液体形式提供。通常情况下对于24孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml约可做160次转染；
储存条件4℃，有效期一年。
注意事项
1）脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293,SFMII,VP-SFM就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和转染试剂的比例，通常推荐是12-13，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5µgDNA和1-1.5µl转染试剂。通过调整DNA/脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）（μl）比值在10.5-15。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人脂爬行酶PLSCR定量检测试剂盒　免疫测定
人受体TNFRSF结合丝苏激酶2RIPK2定量检测试剂盒　免疫测定
人Rho家族GTP酶RND定量检测试剂盒　免疫测定
人脱酶ALDH定量检测试剂盒　免疫测定
人脱酶ADH定量检测试剂盒　免疫测定
人尿嘧啶核苷酶UPP定量检测试剂盒　免疫测定
大鼠环腺苷(cAMP)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒ELISA Kit　Rat cAMP ELISA Kit　
大鼠巨噬细胞移动抑制子(MIF)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒ELISA Kit　Rat Macrophage MigRation Inhibitory Factor ELISA Kit　
大鼠孕激素（Progesterone)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒ELISA kit　Rat Progesterone ELISA kit　
大鼠雌激素（estrogen)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒ELISA Kit　Rat estrogen ELISA Kit　
大鼠CCL24　Rat CCL24 ELISA Kit　
大鼠脂联素（adiponectin)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒ELISA Kit　Rat adiponectin ELISA Kit　
大鼠固(ALD)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒　Rat ALD ELISA Kit　
脂质体核酸转染试剂说明书 冷休克结构域蛋白C2抗体 CD22 ELISA Kit CD22分子(CD22)ELISA试剂盒
洋川芎内酯A;Senkyulide 订购|咨询 规格 50mg
 酶10抗体 CD209 ELISA Kit CD209分子(CD209)ELISA试剂盒
小檗; Berberine hyd 订购|咨询 规格 20mg
 致癌C-Myc抗体 CD15 ELISA Kit CD15分子(CD15)ELISA试剂盒
香兰素;Vanillin 订购|咨询 规格 20mg
 L选择素抗体 CD19 ELISA Kit CD19分子(CD19)ELISA试剂盒
血竭素高盐;Dracohodin p 订购|咨询 规格 20mg
 胆囊收缩素8抗体 CDl4 ELISA Kit CD14分子(CDl4)ELISA试剂盒
土克甾;Turkesterone 订购|咨询 规格 20mg
 上皮钙粘附分子抗体 CD147 ELISA Kit CD147分子(CD147)ELISA试剂盒
丝石竹皂苷元3-O-B-D葡萄糖酯 订购|咨询 规格 20mg
 结合转化激活子CITED1抗体 CD146 ELISA Kit CD146分子(CD146)ELISA试剂盒
三七皂苷Ft1 ;toginsen 订购|咨询 规格 20mg
 Ⅱ型胶原α1蛋白/软骨钙素抗体 CD134 ELISA Kit CD134分子(CD134)ELISA试剂盒
鼠李糖;L-Rhamse moh 订购|咨询 规格 100mg
操作步骤(仅供参考)：
1、脂质体核酸转染试剂说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。