一管式TMB显色液(可溶型)价格

培养操作步骤：
1．一管式TMB显色液(可溶型)价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
中文名称：一管式TMB显色液(可溶型)价格
英文名称：One-Tube TMB Solution
产品规格：100mL
发货周期：1～3天
TMB(四甲基联)是辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase、HRP）的显色底物，在辣根过氧化物酶和H2O2存在时，TMB会产生可溶性蓝色产物（光吸收在370nm），加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度，因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。跟HRP的其他底物（如ABTS和OPD）相比，TMB不但灵敏，而且无毒，所以在ELISA中的应用日趋广泛。传统的TMB显色试剂一般由两个组份组成（另一个是H2O2），必须在使用前新鲜配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致操作误差。为克服这些缺点，本公司开发了只有一个溶液的一管式TMB显色液
产品特点
1.即开即用，操作简单，用户不需要配制任何溶液。
2.显色液只是单一溶液，简化了操作步骤，降低了操作误差，结果更加稳定。
3.既可用于ELISA等的显色液，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
4.该底物溶液含TMB、H2O2和特殊的稳定剂，可以在4℃长期放置。
5.分沉淀可溶型（BTN91101A型，适用于ELISA）和沉淀不可溶型（BTN91101B型，适用于Western印迹膜免疫检测）两种。
保存条件2-8℃避光保存，有效期一年。
使用方法
1.在酶标板的每个孔中直接加入100μl或150μl本产品（A型）。
2.室温温育5-30分钟。
3.向每个孔中加入100μl或150μl终止液。将酶标板置于酶标仪中，450nm处读取数据。
疑难解答
Q在ELISA底物反应过程中，为何有些孔呈蓝色，而另外的孔呈蓝绿色？
A这是TMB底物反应过程中的正常现象，不影响实验结果。这是由于辣根过氧化物酶的浓度过高引起的，建议降低二抗的浓度。
QELISA显色时为何孔中会出现沉淀？
AHRP浓度过高，建议降低二抗-HRP浓度或加入100μl冰酸以溶解沉淀。
Q如何降低背景读数？
A建议降低一抗或二抗浓度，延长封闭时间。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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