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- 2025年07月12日
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一年
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大量
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贝博生物
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100 T
贝博® BBcellProbe® AO/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用AO/PI探针双染细胞核的方法检测凋亡细胞的状态，是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。 吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种具有细胞膜通透性的荧光染料，该染料能透过活细胞膜，使核DNA和RNA染色。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，AO与dsDNA结合时发出绿色荧光，而与ssDNA和RNA结合时发出红色荧光。当与DNA结合时，它与荧光素在光谱上非常相似，激发最大值为502nm，发射最大值为525nm（绿色）。当它与RNA结合时，激发最大值移至460nm（蓝色），发射最大值移至650nm（红色）。 在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
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文献和实验染色工作液配制：
1. 根据样品数，按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂C用900μL纯水稀释，充分混匀即成染色缓冲液。
2. 每500μL 染色缓冲液加入5ul AO染色液和10ul PI染色液，充分混匀，即成染色工作液。
悬浮细胞染色
1. 收集样本细胞，细胞数量在10X105个以内。
2. 用PBS洗涤细胞两次。
3. 用500μL 染色工作液将细胞重悬。
4. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。
5. 用PBS洗涤细胞。
6. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。
贴壁细胞原位染色;
1. 用PBS洗涤细胞2次。
2. 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3. 37 ℃孵育细胞 10～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4. 吸干染色工作液，用培养基洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
结果分析 ：
在荧光显微镜下，选用488nm激发光镜检：
AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色，形态结构正常。
当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染。
坏死细胞呈强红色荧光。
1.Meng Xu, et al.
Hollow mesoporous ruthenium nanoparticles conjugated bispecific antibody for targeted anti-colorectal cancer response of combination therapy
Nanoscale 2019 （IF=7.233）
2.Songhang Li, et al.
MicroRNA‐214‐3p modified tetrahedral framework nucleic acids target survivin to induce tumour cell apoptosis
Cell Proliferation 2019 （IF=5.753）
3.Liang Chen, et al.
Facile synthesis of novel albumin-functionalized flower-like MoS2 nanoparticles for in vitro chemo-photothermal synergistic therapy
RSC Advances 2016 （IF=3.289）
4.Wei Feng, et al.
Flower-like PEGylated MoS2 nanoflakes for near-infrared photothermal cancer therapy
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
