PLP固定液(Nakane-McLean固定液)规格

【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：PLP固定液(Nakane-McLean固定液)规格
英文名称：Periodate-Lysine-Paraformaldehyde Fixative Solution
产品规格：250mL
发货周期：1～3天
PLP固定液即过酸钠-赖氨酸-固定液，又可称为Nakane-McLean固定液。该固定液的作用机制是借助于过酸氧化组织中的糖类形成醛基，通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合，从而与糖形成交联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成，抗原决定簇位于蛋白部分，故该固定液有选择性地使糖类固定，这样既稳定了抗原，又不影响其在组织中的位置关系。
产品特点
1．较适于富含糖类的组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2．即开即用，用户不需单独购买各种试剂来配制。
3．固定时间一般需要12-24小时。
产品组成
成分
溶液A
溶液B
成分C
说明书
储存条件常温运输，4℃避光保存，保存期限半年。
使用方法
一、配制PLP固定液(以配制50mL固定液工作液为例，如果用户需要配制其他体积，请按比例增加或减少各成分的用量)
1．取30mL溶液A加入到50mL的聚乙烯离心管中。
2．继续向离心管中加入10mL的溶液B，混合均匀。
3．称取0.085g成分C的干粉，加入到上步混合液中，搅拌直至干粉溶解，即得到PLP固定液工作液。
注此固定液最好临用前配制，否则时间长了会产生一些沉淀，亦会发生氧化反应，从而影响后续组织固定实验。
二、固定液的使用(以皮肤活组织切片为例)
4．取皮肤活组织，切成小长方块。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
PLP固定液(Nakane-McLean固定液)规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
大鼠脂蛋脂酶A2LpPLA2定量检测试剂盒　免疫测定
大鼠内皮型一合成酶eNOS定量检测试剂盒　免疫测定
大鼠诱导型一合成酶iNOS定量检测试剂盒　免疫测定
大鼠一合成酶NOS定量检测试剂盒　免疫测定
大鼠P53P53定量检测试剂盒　免疫测定
大鼠抗IVIgG抗体定量检测试剂盒　免疫测定
大鼠脂酰肌三羟激酶(PI3K)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 　Rat Phosphoinositide3 kinase ELISA Kit　
大鼠蛋白激酶B（PKB)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒　Rat protein kinase B ELISA Kit　
大鼠分泌型IgA(sIgA)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒　Rat secretory IgA ELISA Kit　
大鼠血红素合酶2(HO2)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 　Rat heme oxygenase2 ELISA Kit　
大鼠骨原交联（CrossLaps)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒　Rat CrossLaps ELISA Kit　
大鼠I型腺原蛋白C末端前肽（CICP)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒　Rat CICP ELISA Kit　
大鼠吩（PyriLinks)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒　Rat PyriLinks ELISA Kit　
PLP固定液(Nakane-McLean固定液)规格 信号转导蛋白亚8抗体 CPN10 ELISA Kit 伴侣蛋白10(CPN10)ELISA试剂盒
花椒素 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
 细胞表面趋化子受体10抗体 Gal-7 ELISA Kit 半糖凝集素7(Gal-7)ELISA试剂盒
根皮素 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
 钙粘蛋白相关的神经受体2抗体 Galactose ELISA Kit 半糖(Galactose)ELISA试剂盒
异类叶升苷 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
 转铁蛋白受体抗体 Galectin3 ELISA Kit 半糖凝集素3(Galectin3)ELISA试剂盒
白花前胡素 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
 细胞周期检测点激酶1抗体 CysLTs ELISA Kit 半胱酰白三(CysLTs)ELISA试剂盒
参皂苷Rb1 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
 钙粘蛋白相关的神经受体1抗体 Cys-C ELISA Kit 半胱蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒
紫草素 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
 尾侧型同源转录子2/3抗体 TMPO ELISA Kit 板层素相关多肽2亚型α(TMPO)ELISA试剂盒
甜菊苷 订购|咨询 规格 HPLC≥95%;20mg
 周期素H抗体 CP ELISA Kit 瘢痕性天疱疮抗体(CP)ELISA试剂盒
莪术醇 订购|咨询 规格 HPLC≥98%;20mg
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。