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- 2025年07月10日
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- 文献和实验
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53
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详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50T|100T
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：线粒体提取试剂盒价格
英文名称：
产品规格：50T|100T
发货周期：1～3天
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤
1.样本处理
a.组织匀浆称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0mL冰预冷的LysisBuffer，0℃冰浴上下研磨组织20次;
b.培养细胞匀浆消化细胞，PBS洗涤，800g离心5~10min收集细胞，计数。每次提取需要5×107个细胞，加入1.0mL冰预冷的LysisBuffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。
2.将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g离心5min。
3.取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g再次离心5min。
4.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5.往线粒体沉淀中加入0.5mLWashBuffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000g离心5min。
6.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7.用50-100μLStoreBuffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。
储存条件-20℃
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
1-(2-苄氧-4-)变色素2R/变色2R/偶变色/变蓝2R/性红29/变2R/Chromotrope 2R
4,4'-亚-双(3--2,6-二)黑色素(醇溶)/酒精元/油溶黑5/醇溶尼格洛辛/精元/黑/醇溶黑/醇黑/醇溶黑/油溶黑/醇溶黑色素/Nigrosine alcohol soluble
庚酯黑色素(水溶)/性黑2/水溶灰/水溶尼格洛辛/性粒子元/性粒子元NBL/性皮元NL/性粒子元青/二吲哚黑/水溶性黑/Nigrosine water soluble
O,O-二二代铵, 一般为苏木色精/苏木素/Hematoxylin
5--2-三啶姬姆萨氏色素/吉氏色素/姬姆色素/吉氏溶/吉姆氏色素/姬姆氏色素/吉姆萨染料/姬姆氏色素染料/3-(二)-7-吩噻嗪-5-鎓化物/Giemsa′s Stain
2--3--4-(酰)瑞氏色素/曙红亚蓝I/瑞氏染色素/赖氏色素/曙红变性次蓝/瑞氏染/Wright′s stain
结晶紫/龙胆紫/青莲/紫10B/六紫/六玫盐盐/盐紫3/紫/紫/性紫3/性紫5BN/盐品紫/紫5GN/性紫6BN/性艳紫3B/盐青莲/盐结晶紫/性青莲/303盐青莲2B/盐青莲粒2B/化六对品红/Crystal violet
Boc-1-环醇叶绿素A/叶绿素镁/Chlorophyll A
1-吲唑-4-羧叶绿素B/叶绿素镁/Chlorophyll B
N-Boc-L-甘醇叶绿素铜盐/叶绿铜/Chlorophyllin
线粒体提取试剂盒价格Cupric bromide溴铜7789459
Nicotine ditartrateL烟65316
(R,R)2,2'(2,6PYRIDINEDIYL)BIS(4ISOPROPYL2OXAZOLINE)(R,R)2,6双(4异2恶唑啉2)131864670
Spectinomycin大观霉素1695778
VIOLURIC ACID MONOHYDRATE紫脲26351199
3Bromobenzoyl chloride3溴酰1711097
Vegiben 2E草灭平7286842
4Bromo2chlorobenzoic acid4溴259748902
Diammonium glycyrrhizinate甘草二铵79165063
3Hydroxy2naphthoic acid2羟392706
Dimethylcarbamoyl chloride二酰79447
NAL谷
ACETOXYACETONE过酰592201
ACHISOH H2ON酰L组39145523
3Methylcyclohexanol3环591231
(R型)原参二 订购|咨询 规格 20mg
桑皮苷C 102841430 订购|咨询 规格 20mg
苍术对照药材 订购|咨询 规格 1g
乌药对照药材 订购|咨询 规格 1g
维生素A 127479 订购|咨询 规格 20mg
异甘草素 961295 订购|咨询 规格 20mg
古伦宾 订购|咨询 规格 20mg
高黄芩素 529533 订购|咨询 规格 20mg
槲皮素3OβD葡糖糖7O 订购|咨询 规格 20mg
苦楝皮对照药材 订购|咨询 规格 1g
尿 66228 订购|咨询 规格 20mg
加兰他敏 357700 订购|咨询 规格 20mg
大豆苷 552669 订购|咨询 规格 20mg
缬草三 缬草素 18296441 订购|咨询 规格 20mg
知母皂苷BⅡ 136656070 订购|咨询 规格 20mg
操作步骤(仅供参考)：
1、线粒体提取试剂盒价格贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
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发货周期：1～3天
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操作步骤
1.样本处理
a.组织匀浆称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0mL冰预冷的LysisBuffer，0℃冰浴上下研磨组织20次;
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2.将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g离心5min。
3.取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g再次离心5min。
4.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5.往线粒体沉淀中加入0.5mLWashBuffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000g离心5min。
6.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7.用50-100μLStoreBuffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。
储存条件-20℃
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
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2--3--4-(酰)瑞氏色素/曙红亚蓝I/瑞氏染色素/赖氏色素/曙红变性次蓝/瑞氏染/Wright′s stain
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1、线粒体提取试剂盒价格贴壁细胞的消化
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②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
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⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验相关实验
以下操作按照天根产品 DP433 血液总 RNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 新鲜血液样品（ 200 μl ）2. 无水乙醇，β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴 台式低温离心机本文版权归天根生化科技
以下操作按照天根产品 DP432 植物总 RNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 植物样品（10-20 mg），研钵，液氮2. 无水乙醇，β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴 台式低温离心机本文版权归天
RNAsimple 总 RNA 提取试剂盒操作指南（DP419） ——植物
以下操作按照天根产品 DP419 RNAsimple 总 RNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 植物叶片 研钵 液氮2. 无水乙醇 氯仿3. 移液器及配套 RNase-free 无菌枪头（200 μl ，1ml），1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 涡旋振荡器，台式低温离心机实验准备-试剂盒准备：第一次使用前应在去蛋白液 RD、漂洗液 RW 中
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