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- 2025年07月13日
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43
- 英文名：
Puromycin Dihydrochloride
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
25mg
英文名称：Puromycin Dihydrochloride
产品规格：25mg
发货周期：1～3天
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomycesalboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomycesalboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
CAS58-58-2
分子式C22H29N7O5·2HCl
分子量544.43
纯度（Purity,HPLC）＞98%
外观白色至米白色粉末
储存条件-20℃，有效期2年
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．嘌呤霉素盐酸盐说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
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文献和实验sophiaying 有哪位用过SB203580盐酸盐么？说是水溶，但是溶解性很差啊，我按照说明书配成10 Mg/ml，但加生理盐水50度加热了4个小时都没溶啊，期间还无数次涡流震荡，哪位能给些建议么？ xiaoxiaoga 用DMSO溶解试试看，先用DMSO溶解成高浓度溶液，再用培养基或者二PBS稀释成使用液 selleckchem01 SB203580一般是先用DMSO溶解作为母液储存
导致压力不稳，压力上不去。单向阀故障主要有： 1、单向阀被异物堵塞，吸不上液。解决办法是用超声波清洗单向阀组件。 2、单向阀两相都通，压力上不去。解决办法重装单向阀或向厂家求助。 3、单向阀内有气泡，表现是压力上不去，或不稳，解决办法用大流量冲洗单向阀（6ml/min). 4、单向阀泄露，要更换密封装置。柱压不稳不一定来自色谱柱。要了解单向阀的结构（说明书一般都有介绍） 三、缓冲液应用的几点建议 缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾
siRNA和转染试剂的用量。具体优化方法可以在Entranster-R的说明书上看到。经过优化后，据我们和客户的经验，对NIH3T3，沉默效率应该可以达到80％以上。 （2）在沉默的峰值点观察结果，如在mRNA水平，可在24-48小时观察，在蛋白水平，可在更长时间如48-72小时观察。具体时间根据具体基因的表达情况确定。 （3）优化转染时的细胞数量。转染时较少的细胞数量，可延长观察时间，同时避免由于细胞密集造成的抑制。 3、问：21nt,22nt,24nt的siRNA如何进行电泳分辨
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