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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系:
详见说明书
- 细胞类型:
详见说明书
- 肿瘤类型:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 库存:
41
- 英文名:
牦牛皮肤细胞
- 生长状态:
贴壁
- 年限:
详见说明书
- 运输方式:
电询
- 器官来源:
详见说明书
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 免疫类型:
详见说明书
- 物种来源:
详见说明书
- 相关疾病:
详见说明书
- 组织来源:
皮肤
- 规格:
详见说明书
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
以下是产品信息的认购信息:
产品名称: 牦牛皮肤细胞培养
商品货号: EY-Z7327
中文名称: 牦牛皮肤细胞
细胞数量:1*10^6
组织来源:皮肤
细胞种属:牦牛
生长特性:贴壁
细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
培养基:H-DMEM,90%;FBS,10%;双抗。
传代方法:1:2-1:4
培养条件:Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃
细胞传代步骤:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1.
复苏细胞步骤:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞冻存:Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%(for reference)Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
细胞运输:干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25细胞瓶)
培养步骤:
牦牛皮肤细胞培养对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作流程:
1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。
纤维蛋白溶酶原(牛血)(牛纤溶酶原)英文名称:Plasminogen (Niu Xue) (bovine plasminogen)规格:10U/支细菌DNAout(250次)
凝血酶(牛血)英文名称:Thrombin (Niu Xue)规格:150BP 单位/支细菌DNAout(50次)
尿激酶英文名称:Urokinase规格:1240IU/支一步式细菌DNAout
玻璃酸酶英文名称:Hyaluronidase规格:200 IU/支柱式分枝杆菌DNAout
可溶性淀粉英文名称:Soluble starch规格:10g柱式水样DNAout
酪蛋白英文名称:Casein规格:7g/瓶柱式土壤DNAout
乳糖发酵培养基英文名称:Lactose fermentation medium规格:3.0g /100mL,20袋/盒柱式微生物基因组DNAout
四硫酸钠亮绿对照培养基基础英文名称:Four sulfonic acid sodium light green contrast medium base规格:4.5g/100ml柱式细菌DNAout(50次)病毒DNA提取
溴化十六烷基三脂对照培养基英文名称:Sixteen alkyl trimethyl amine bromide agar control medium规格:13.6g /300mL,20袋/盒96孔板病毒DNAout(离心法)(1次)
哥伦比亚琼脂对照培养基英文名称:The control Columbia agar culture medium规格:13.2g/300ml96孔板病毒DNAout(离心法)(5次)
绿脓菌素测定用对照培养基基础英文名称:Pyocyanin determined by contrast medium base规格:13.9g/300ml96孔板病毒DNAout(真空法)(见关联产品)
念珠菌显色对照培养基英文名称:Candida color contrast medium规格:4.8g/100mlM13噬菌体单链基因组DNAout(见关联产品)
沙氏葡萄糖琼脂对照培养基英文名称:Sabouraud dextrose agar control medium规格:19.5g/300mlλ噬菌体DNAout(见关联产品)
沙门、志贺菌属琼脂对照培养基英文名称:Salmonella, Shigella Agar control medium规格:18.0g/300ml一管式病毒DNA-RNAout
麦康凯琼脂对照培养基英文名称:Mark Kang Kai agar control medium规格:15.6g/100ml一管式病毒DNAout(200次)
牦牛皮肤细胞培养ANKRD28 锚蛋白重复域28抗体规格 0.2ml
ANKRD26 锚蛋白重复结构域蛋白26抗体规格 0.2ml
ANKRD26 锚蛋白重复结构域蛋白26抗体规格 0.2ml
ANKRD22 锚蛋白重复结构域蛋白22抗体规格 0.2ml
ANKRD20A3 锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体规格 0.2ml
ANKRD20A1 锚蛋白重复结构域蛋白20A1抗体规格 0.2ml
ANKRD17 锚蛋白重复结构域蛋白17抗体规格 0.2ml
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