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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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32
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20T
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)说明书
英文名称：
产品规格：20T
发货周期：1～3天
保存条件-20℃冰冻保存。
保存期一年
工作原理
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(TerminaldeoxynucleotidylTransferase)可以将标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至3’-OH末端，DIG-dUTP结合在DNA断点部位，可以通过生物标记的抗抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合荧光素FITC或者过氧化物酶POD标记的链酶亲和素(SABC-FITC/SABC-POD)。FITC在490-495nm激化，在520-530nm发射荧光，在荧光显微镜下呈明亮黄绿色。POD的在加入显色底物DAB显色后，凋亡的细胞核呈棕黄色。用户根据实验需要，在不同切片上用两套不同显示系统观察。
试剂盒内容
1．标记缓冲液(LabelingBuffer)1ml
2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3．DIG-dUTP(×20)20μl
4．封闭液(BlockingReagent)4ml
5．生物素化抗抗体(×100)20μl
6．SABC-FITC(×100)20μl
7．SABC-POD(×100)20μl
8．ProteinaseK(×200)50μl
9．抗体稀释液4ml
10．未染色阳性对照片2张。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
1-N-苄氧羰嗪-2-酯麦芽糖一水合物/D-(+)-麦芽糖单水合物/饴糖/淀糖/4-O-α-D-喃葡糖-D-葡萄糖/Maltose monohydrate
1--1H-唑-4-D-麦芽糖/饴糖/麦芽糖/淀糖/4-O-α-D-喃葡糖-D-葡萄糖/Maltose
H-89 脂多糖/LPS
二茂铁昆布多糖/海带多糖/Laminarin from Laminaria digitata
3--4-溴溴苄D-山梨醇/D-山梨糖醇/D-清凉茶醇/花楸醇/蔷薇醇/D-葡萄糖醇/己六醇/D-Sorbitol
6--1,8-二萘-2(1H)-L-山梨糖/清凉茶糖/花楸糖/L-Sorbose
2--4-酯蔗糖/β-D-果糖- α-D-喃葡萄苷/β-D-果糖-α-D-喃葡糖/α-D-喃葡糖-β-D-果糖/D（+）蔗糖/甜菜糖/Sucrose
N,N-双(4-)-3-阿拉伯树胶/阿拉伯树脂/树胶/Gum acacia powder
2--4-氧腈D-阿拉伯糖/D-树胶糖/D-阿糖/D-阿糖/D-树脂糖/D-(−)-Arabinose
1-二茂铁醇D-纤维二糖/纤维二糖/4-O-β-D-喃葡萄糖-D-葡萄糖/D-cellbiose
细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)说明书聚异标准品 Polyisobutylene CAS9003274
聚甘油3 二异硬脂酯标准品 Polyglyceryl 3 Diisostearate CAS63705033
聚标准品 Polyethylene Oxide CAS25322683
聚二8000标准品 Polyethylene Glycol 8000 CAS25322683
聚二6000标准品 Polyethylene Glycol 6000 CAS25322683
聚二600标准品 Polyethylene Glycol 600 CAS25322683
聚二4000标准品 Polyethylene Glycol 4000 CAS25322683
聚二400标准品 Polyethylene Glycol 400 CAS25322683
聚二35000标准品 Polyethylene Glycol 35000 CAS25322683
聚二3350标准品 Polyethylene Glycol 3350 CAS25322683
聚二3000标准品 Polyethylene Glycol 3000 CAS25322683
聚二300标准品 Polyethylene Glycol 300 CAS25322683
聚二20000标准品 Polyethylene Glycol 20000 CAS25322683
聚二200标准品 Polyethylene Glycol 200 CAS25322683
聚二1500标准品 Polyethylene Glycol 1500 CAS25322683
盐DL精 进口、国产 DLArginineHC1 含量BR，99%
盐D酯 进口、国产 DAlanineMethylEsterHydrochloride 含量BR，98%
盐D甘露糖 进口、国产 DMannosamineHC1 含量高，98%
盐D酪酯 进口、国产 DTyrosineMethylesterhydrochloride 含量ACS，98%
盐L酯 进口、国产 LAlaninemethylesterhydrochloride 含量BR，98%
盐L酪酯 进口、国产 LTyrosinemethylesterhydrochloride 含量ACS，98%
盐N,N二 进口、国产 N,NDimethylglycinehydrochloride 含量BR
盐Na酰L精酯 进口、国产 BAEE 含量BR，98%
盐黄 进口、国产 Acriflavinehydrochloride 含量BR，99%
盐 进口、国产 Acridinehydrochloride 含量99%
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)说明书
英文名称：
产品规格：20T
发货周期：1～3天
保存条件-20℃冰冻保存。
保存期一年
工作原理
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断点数目相同的3’-OH末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(TerminaldeoxynucleotidylTransferase)可以将标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至3’-OH末端，DIG-dUTP结合在DNA断点部位，可以通过生物标记的抗抗体(Anti-DIG-Biotin)反应后，再结合荧光素FITC或者过氧化物酶POD标记的链酶亲和素(SABC-FITC/SABC-POD)。FITC在490-495nm激化，在520-530nm发射荧光，在荧光显微镜下呈明亮黄绿色。POD的在加入显色底物DAB显色后，凋亡的细胞核呈棕黄色。用户根据实验需要，在不同切片上用两套不同显示系统观察。
试剂盒内容
1．标记缓冲液(LabelingBuffer)1ml
2．末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3．DIG-dUTP(×20)20μl
4．封闭液(BlockingReagent)4ml
5．生物素化抗抗体(×100)20μl
6．SABC-FITC(×100)20μl
7．SABC-POD(×100)20μl
8．ProteinaseK(×200)50μl
9．抗体稀释液4ml
10．未染色阳性对照片2张。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
1-N-苄氧羰嗪-2-酯麦芽糖一水合物/D-(+)-麦芽糖单水合物/饴糖/淀糖/4-O-α-D-喃葡糖-D-葡萄糖/Maltose monohydrate
1--1H-唑-4-D-麦芽糖/饴糖/麦芽糖/淀糖/4-O-α-D-喃葡糖-D-葡萄糖/Maltose
H-89 脂多糖/LPS
二茂铁昆布多糖/海带多糖/Laminarin from Laminaria digitata
3--4-溴溴苄D-山梨醇/D-山梨糖醇/D-清凉茶醇/花楸醇/蔷薇醇/D-葡萄糖醇/己六醇/D-Sorbitol
6--1,8-二萘-2(1H)-L-山梨糖/清凉茶糖/花楸糖/L-Sorbose
2--4-酯蔗糖/β-D-果糖- α-D-喃葡萄苷/β-D-果糖-α-D-喃葡糖/α-D-喃葡糖-β-D-果糖/D（+）蔗糖/甜菜糖/Sucrose
N,N-双(4-)-3-阿拉伯树胶/阿拉伯树脂/树胶/Gum acacia powder
2--4-氧腈D-阿拉伯糖/D-树胶糖/D-阿糖/D-阿糖/D-树脂糖/D-(−)-Arabinose
1-二茂铁醇D-纤维二糖/纤维二糖/4-O-β-D-喃葡萄糖-D-葡萄糖/D-cellbiose
细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)说明书聚异标准品 Polyisobutylene CAS9003274
聚甘油3 二异硬脂酯标准品 Polyglyceryl 3 Diisostearate CAS63705033
聚标准品 Polyethylene Oxide CAS25322683
聚二8000标准品 Polyethylene Glycol 8000 CAS25322683
聚二6000标准品 Polyethylene Glycol 6000 CAS25322683
聚二600标准品 Polyethylene Glycol 600 CAS25322683
聚二4000标准品 Polyethylene Glycol 4000 CAS25322683
聚二400标准品 Polyethylene Glycol 400 CAS25322683
聚二35000标准品 Polyethylene Glycol 35000 CAS25322683
聚二3350标准品 Polyethylene Glycol 3350 CAS25322683
聚二3000标准品 Polyethylene Glycol 3000 CAS25322683
聚二300标准品 Polyethylene Glycol 300 CAS25322683
聚二20000标准品 Polyethylene Glycol 20000 CAS25322683
聚二200标准品 Polyethylene Glycol 200 CAS25322683
聚二1500标准品 Polyethylene Glycol 1500 CAS25322683
盐DL精 进口、国产 DLArginineHC1 含量BR，99%
盐D酯 进口、国产 DAlanineMethylEsterHydrochloride 含量BR，98%
盐D甘露糖 进口、国产 DMannosamineHC1 含量高，98%
盐D酪酯 进口、国产 DTyrosineMethylesterhydrochloride 含量ACS，98%
盐L酯 进口、国产 LAlaninemethylesterhydrochloride 含量BR，98%
盐L酪酯 进口、国产 LTyrosinemethylesterhydrochloride 含量ACS，98%
盐N,N二 进口、国产 N,NDimethylglycinehydrochloride 含量BR
盐Na酰L精酯 进口、国产 BAEE 含量BR，98%
盐黄 进口、国产 Acriflavinehydrochloride 含量BR，99%
盐 进口、国产 Acridinehydrochloride 含量99%
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验相关实验
【求助】Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒的使用
mmsong1987 我买了Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒，想研究某种材料的细胞毒性，看其是否会诱导细胞凋亡。之前做过MTT之类的检测，结果显示材料基本无毒性。 由于条件限制（流式细胞仪在我们学校另一个校区）不能及时进行检测，前两天进行了一次实验，是将细胞收集后拿到测试地点再进行的荧光染色处理，检测结果显示阴性对照组没有加材料处理的细胞也多处于凋亡状态，个人猜测可能跟细胞在路上耽误的时间有关（悬浮在Annexin V结合液中
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技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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