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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
44
- 英文名:
Protein A Immunoprecipitation Kit
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
20次/100次
1、ProteinA免疫沉淀磁珠试剂盒哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:ProteinA免疫沉淀磁珠试剂盒哪家好
英文名称:Protein A Immunoprecipitation Kit
产品规格:20次/100次
发货周期:1~3天
产品简介
ProteinA/GMatrix免疫沉淀磁珠及试剂盒系列产品是利用纳米表面技术使ProteinA/G高密度定向包被到超顺磁性微球表面,与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比,该产品具有更多的抗体结合位点,磁珠使用量更少,非特异性结合率低,可便捷高效地进行免疫沉淀实验。每毫升免疫沉淀磁珠结合HumanIgG的能力可达到300μg以上,单个沉淀反应仅需25μL磁珠即可完成检测。微米级磁珠提供的超大比表面积,大幅缩短抗体与抗原吸附所需的平衡时间,15min内即可完成抗体吸附过程,30min内完成抗原沉淀操作。简短的操作时间避免长时间操作造成目标蛋白水解,保证了目标蛋白的活性及蛋白复合物的完整性。
免疫沉淀磁珠试剂盒配有经过优化预制的缓冲液,为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件,增强了免疫沉淀实验的稳定性。
本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。操作者可以参考本操作说明书,附表1的数据了解不同种属来源及亚型的抗体与ProteinA磁珠、ProteinA/G的结合能力。
储存条件2~8℃保存
保存期1年
注磁珠结合HumanIgG能力(AntibodyCapacity)分别为ProteinA0.4~0.5mg/mL;ProteinA/G0.5~0.6mg/mL
操作流程
1.抗原样品制备本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。
血清样品处理若目标蛋白丰度较高,建议用结合缓冲液(②)稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10~100μg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
悬浮细胞样品处理离心收集细胞(4℃,500g,10min),弃上清后称重,按每毫克细胞50μL的比例用1×PBS(③)洗涤2次;按每毫克细胞5~10μL的比例加入结合缓冲液(②),同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM的PMSF),混匀后置于冰上处理10min;离心收集上清液(4℃,14000g,10min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
贴壁细胞样品处理移去培养基,按每1.0×105个细胞150μL的比例用1×PBS(③)洗涤两次;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mLEP管内,按每1.0×105个细胞20~30μL的比例加入结合缓冲液(②),同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM的PMSF),混匀后置于冰上处理10min;离心收集上清液(4℃,14000g,10min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
大肠杆菌样品处理离心收集大肠杆菌(4℃,12000g,2min),弃上清后称重,按每克(湿重)菌体10mL的比例用1×PBS(③)洗涤2次;按每克(湿重)菌体5~10mL的比例加入结合缓冲液(②),同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM的PMSF),重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃,17000g,10min)。
2.磁珠预处理将免疫沉淀磁珠(①)漩涡振荡1min,使磁珠充分振荡重悬;取25~50μL磁珠悬液置于1.5mLEP管中。加入200μL结合缓冲液(②)洗涤,进行磁性分离[将EP管放置于磁性分离器(⑦)上,使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清;该操作描述以下省略],弃上清液,从磁性分离器上取下EP管,重复洗涤一次。最后加入200μL结合缓冲液(②)重悬磁珠以备用。
3.抗体结合反应
抗体工作液的制备用结合缓冲液(②)稀释抗体样品,配制成终浓度为5~50μg/mL抗体工作液,置于冰上备用。
抗体吸附将步骤2预处理的磁珠悬液进行磁性分离,弃上清液;加入200μL抗体工作液,迅速重悬后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管,15min后进行磁性分离,收集上清液置于冰上以备后续检测。
洗涤向EP管中加入200μL结合缓冲液(②)洗涤,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液,从磁性分离器上取下EP管。重复以上洗涤操作一次。
4.抗体交联反应(备选)如操作者需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱,请忽略本步骤,进行步骤5。
本步骤适用于操作者需要单独洗脱目标抗原的试验,推荐使用BS3(ThermoScientific,Cat.#21580)作为交联剂,相关实验请参照该试剂的操作说明。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Coronene六并1克CP
Corn starch玉蜀黍淀10克AR,99%
Cordyceps polysaccharide虫草多糖25克CP
Copric chloride dihydrate二化铜1克CP,98.5%
Copper(II) chloride无水化铜(Ⅱ)5克AR,99%
Copper pyrophosphate焦铜5克3N,99.9%
Copper gluconate双(D-葡糖)铜50克BR,玉米来源
Copper 8-quinolinonate8-羟铜1克CP,98.5%
Copper铜100克BR,99.5%
Copper海绵铜500毫升CP
Copper电解铜500克AR,99.5%
Coomassie brilliant blue R250考马斯亮兰R250100克超,99%
Coomassie brilliant blue G250考马斯亮兰G25025克BR,
Congo red test paper刚红试纸1克BR,99%
Congo red直接刚红250毫克超,99%
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