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- 2025年07月15日
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- 技术资料
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41
- 英文名：
RIPA Lysis Buffer For Co-IP/IP
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
英文名称：RIPA Lysis Buffer For Co-IP/IP
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
对目的蛋白进行检测分析时，总蛋白的提取至关重要，如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败，如信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液，才能最大程度地保证后续实验的成功。Co-IP/IPRIPALysisBuffer对细胞有一定的裂解能力，能获得较多的胞浆蛋白，而对细胞核的裂解能力有限，不能完全裂解细胞核，因此获得的总蛋白适用于IP或CO-IP实验。
产品特点
1．可很好的释放胞浆蛋白，部分释放膜蛋白和核蛋白。
2．经Co-IP/IPRIPALysisBuffer，核蛋白与DNA还紧密结合在一起，离心后会造成核蛋白的丢失。
3．对于膜蛋白，Co-IP/IPRIPALysisBuffer的破坏力小，不能使膜蛋白与膜充分分离，故离心后造成膜蛋白的丢失。
储存条件置于室温阴凉处，可保存2年。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP)规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
以下是公司正在热销产品：
Cyclohexanone环已25克AR，99.8%
Cyclohexanol六100克GR，99.8%
Cyclo-C盐环胞5克试剂级，99%
cyclic GMP3',5'-环一鸟苷盐500u高，
Cyanuric chloride2,4,6-三-1,3,5-三嗪5克AR，
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Cupric subcarbonate盐性铜5克CP，99%
RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP)规格L-组酯Ginsenoside Rb2Chloramphenicol 霉抗体(LDH)ELISA Kit 大鼠脱酶小鼠白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产DL-酯盐盐Ginsenoside Rb3特价供应ADAR1 (N-terminus) 双链RNA苷脱酶抗体（N端）PRL (Rabbit prolactin) ELISA Kit 兔子催猪白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产DL-丝酯盐盐Ginsenoside Rg1现货促销BRLF1 立即早期癌BRLF1抗体（鼻咽癌）MUC5B ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘5B大鼠白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-半胱酯盐盐Ginsenoside Rg2特价促销ADAR1 (C-terminus) 双链RNA苷脱酶抗体（C端）Cobra venom factor,CVF ELISA Kit 蛇子兔白介17(IL-17)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴
—— co-IP 检测 Hsp90 与 Cdc37 结合情况1、实验材料SKBR3 细胞，PMSF（Amresco，cat:329-98-6），cocktail（上海晶莱生物），脱脂奶粉（cat:66196131T），β-actin（上海晶莱生物）。Anti-Hsp90(santa,cat:sc-69703)、Anti-Cdc37(santa,cat:sc-13129)、Protein A+G agrose(Beyotime)，细胞刮，4 度离心机（eppendorf，centrifuge
一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads
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