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- 上海研生
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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
34
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1盒
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：DAB显色试剂盒(蓝)×20规格
英文名称：
产品规格：1盒
发货周期：1～3天
试剂盒中的内容及包装规格
显色剂ADAB×20倍浓缩液,3ml。
显色剂BH2O2×20倍浓缩液,3ml。
显色剂CTBS×20倍浓缩缓冲液(含化镍)，3ml。
产品保存-20℃冷冻保存一年。
DAB是过氧化物酶最重要的显色剂之一，在加金属镍盐的情况下，显色呈鲜艳的紫蓝色，可用于免疫组化及各种斑点检查法。本试剂盒采用液体性滴瓶包装，使用方便，并且减少了接触有潜在毒性的DAB。
使用方法
1．在过氧化物酶的检测完成以后，TBS或PBS充分洗涤，一般5分钟×4次。
2．按1ml蒸馏水加显色剂A，B，C各１滴，混匀。加至标本上。一般显色10-30分钟，若无背景出现则可继续显色。
3．蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时核固红复染5分钟左右，水洗。
4．中性树胶封片，显微镜观察。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
DAB显色试剂盒(蓝)×20规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
蔗糖 含量：≥98% 规格：20mg/支
Sucrose 含量：≥98% 规格：10mg/支
苏丹Ⅳ 含量：≥98% 规格：10mg/支
Sudan Ⅳ 含量：≥98% 规格：10mg/支
苏丹B 含量：≥98% 规格：20mg/支
Sudan Black B 含量：≥98% 规格：20mg/支
恶唑 含量：≥98% 规格：20mg/支
Sulfamethoxazole 含量： 规格：5mg/支
镍 含量：暂不提供 规格：1ml，3ml
Nickel Sulfate, Hexahydrate 含量：暂不提供 规格：1ml，3ml
烟(尼古) 含量：暂不提供 规格：50次，200次
Nicotinic Acid 含量：暂不提供 规格：50µl，250µl
茚三 含量：暂不提供 规格：50µl，250µl
Ninthydrin 含量：暂不提供 规格：20次，50次
n辛βD葡萄糖苷 含量：暂不提供 规格：20次，50次
nOctylβDGlucopyranoside 含量：暂不提供 规格：50次，100次
DAB显色试剂盒(蓝)×20规格48T/96T进口、国产1620Cisapride检查
CiprofloxacinHydrochloride48T/96T进口、国产1620检查
48T/96T进口、国产1620Cilostazol含量测定
Cisplatin48T/96T进口、国产1620含量测定
CitricAcid48T/96T进口、国产1620检查
Clarithromycin48T/96T进口、国产1620含量测定
48T/96T进口、国产1620含量测定
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验。6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。7）滴加 Ⅰ 抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。8）PBS洗三次每次2分钟。9）滴加生物素化二抗,20℃～37℃ 20 分钟。10）PBC 洗 3 次每次 2 分钟。11）滴加试剂SABC，20℃～37℃ 20 分钟。12）PBS 洗 4 次每次 5 分钟。13）DAB 显色：DAB 显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。14）蒸馏水洗。苏木素复染 2 分钟、盐酸酒精分化。15）脱水、透明
梯度（两个孔）取其平均值减去空白后制作标准曲线得到曲线公式。测得的样品的 OD 值（三个孔）取其平均值按标准曲线的公式运算得到蛋白浓度，按 50 μg/上样孔的标准来计算上样量，算法为：上样量= 50/蛋白浓度。注：所有得到的 OD 值必须减去背景（标曲中空白孔的 OD 值）后再计算。 样品处理： 蛋白样品：5×SDS 上样缓冲液按照 4：1 比例混合沸水浴 10 min 左右。浓度过高的样品可用 PBS 稀释后再煮样。样品煮好后 -20 ℃ 保存待用（可保存半年），样品长期保存须置于 -70
试剂盒 我们开发了此步免疫检测的完整的试剂盒,即HRP标记的二抗检测系统(含封闭液,洗液,底物,HRP/亲和素-二抗),您只需准备好一抗,并选择和一抗动物来源相应的试剂盒就可以.对于实验来说,采用完整的试剂盒可以避免各种试剂的不匹比而带来的结果不理想. Western Blotting DAB显色法检测试剂盒 试剂盒的内容： （1）封闭试剂：10g蛋白质干粉2包。 （2）浓缩抗体稀释液：20ml×2瓶，为10倍浓缩液。 （3）过氧化物酶标记二抗。1ml。效价1：200―400 （4）DAB浓缩
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