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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
44
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20片
1．硝酸纤维素薄膜(NC膜)0.22μm9cm×10cm规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：硝酸纤维素薄膜(NC膜)0.22μm9cm×10cm规格英文名称：
产品规格：20片
发货周期：1～3天
产品规格0.22μm9cm×10cm/张20张/包
产品保存室温保存，一年有效。
产品简介
硝酸纤维膜能产生极好的结果，处理和保存更为简单。它不含纤维和树脂载体，是纯净的致密硝酸纤维，是一种已经验证的可应用于Western、Northern和Southern印迹杂交的介质。孔径为0.45µm的硝酸纤维膜推荐用于大多数分析型转印，孔径为0.22µm的硝酸纤维膜可用于转移小分子量蛋白(<20kD)或核酸，能避免由于膜转移而导致的样品损失。
使用说明
1.使用前需用转印液完全浸润5-10秒。
2.实验的任何步骤务必保持膜湿润。
3.本硝酸纤维素膜适用于化学发光(如BeyoECLStar、BeyoECLPlus、ECL等)、常规显色(如DAB、TMB)、染色、同位素和荧光等方法进行检测。
注意事项
1.膜两面都可与蛋白结合。
2.使用时请带上手套，以免手上油污沾染到膜上面。
3.可与丽春红，氨基黑，印度墨水,胶体金，CPTS等多种染料兼容。(其中丽春红、CPTS等染料染色后，染料可以被洗掉，膜可以用做进一步的分析用；而酰黑、印度墨水等染料是不可逆的，染色后膜就不能用于进一步的分析)。
4．硝酸纤维素膜比较脆，容易破碎，操作要小心。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验工艺的问题，使用后灵敏度会在一段时间内发生变化，遇到这种问题，就需要在点膜后放置一段时间，待稳定后方可进入调试生产。 硝酸纤维素膜NC膜 规格: 15X20cm 孔径: 0.45μm 保存: 5-15℃密封保存,保质期一年 产品简介: 本品外观洁白，膜正面呈光泽，与水接触应立即浸润，不能立即浸润老者视为失活，不能点样，膜面有花斑或有粉性结构皆视为次品。用于转移电泳，宜选孔经0.22或0.45，以保证膜的强度，并减少穿透损失，硝纤膜过份干燥时脆,湿时有弹性，操作时室内应保持
形式，灵敏、可重复的检测试剂的生产需要试剂生产商采用有效的途径制备检测线工作液。快速诊断试剂生产商经常对如何优化检测线相关的文章非常感兴趣。这些文章可以有助于研发人员涉及关于蛋白质固着于硝酸纤维素膜基本原理的讨论，并对研发人员在开发免疫层析试剂中面临的常见问题给予强调。由于关于蛋白质吸附于NC膜的问题普遍存在于侧向层析，因此这篇文章重点讨论这方面的问题。蛋白质吸附的重要性在免疫层析检测中，蛋白质固着于NC膜作为待测样本的捕获试剂。由于检测结果完全取决于捕获试剂在膜上达到良好的吸附效果，因此蛋白
器轻轻印在点样区内，样品线长度一般为1.5cm，宽度一般不超过3mm如图1-2-8所示，使血清完全渗透至薄膜内，形成一定宽度、粗细均匀的直线，此步是实验的关键，点样前应在滤纸上反复练习，掌握点样技术后在正式点样。 图1-2-8，醋酸纤维素薄膜规格及点样位置虚线处为点样位置3、电泳用钝头镊子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上。如图1-2-9所示，要求薄膜
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