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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
25
- 英文名：
Immunol Fluorence Staining Kit with Alexa Fluor 488-Labeled Goat Anti-Mouse IgG
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
>300次
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：AlexaFluor488抗小鼠免疫荧光染色试剂盒规格
英文名称：Immunol Fluorence Staining Kit with Alexa Fluor 488-Labeled Goat Anti-Mouse IgG
产品规格：>300次
发货周期：1～3天
本试剂盒含有AlexaFluor488标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体，可以用于检测小鼠来源的相应一抗，观察到的颜色为非常鲜艳的绿色。AlexaFluor488是一种常用的非常明亮的绿色荧光探针。它比绝大部分常用的绿色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。AlexaFluor488的荧光光谱与FITC和Cy2比较接近。AlexaFluor488的吸收峰495nm、发射峰519nm。本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液，可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月，并且在6个月内至少可以重复使用10次。本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片，至少可以检测300个样品。
试剂盒组份
抗小鼠AlexaFluor488—————30μl
免疫荧光染色二抗稀释液—————50ml
抗荧光淬灭封片液————————15ml
注意事项
1.需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2.在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光，特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3.荧光物质均易发生淬灭，染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存，但存放时间通常不宜超过一周，随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。
4.免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
5.如果观察时发现荧光过弱，可以适当提高一抗的浓度；如果荧光还是比较弱，可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
储存条件-20℃，有效期一年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
AlexaFluor488抗小鼠免疫荧光染色试剂盒规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
3邻二 Dimethylglyoxime 质量规格：AR
2,4,6—三... Flavone 质量规格：>98%,进分
1 Ivermectin 质量规格：>95%,BR
1 CFDA SE;Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester 质量规格：≥90%，用于荧光标记
5 CAPE (Caffeic Acid Phenethylester) 质量规格：>98%,BR
4 Sulfameter 质量规格：>98%
4 Amitraz 质量规格：HPLC>98%,分析标准品
AlexaFluor488抗小鼠免疫荧光染色试剂盒规格ALADδ酰脱水酶抗体小鼠血管紧张素原(aGT)ELISA试剂盒63456
TPTE肿瘤/睾抗原44抗体小鼠热休克蛋白60(Hsp60)ELISA试剂盒125337
ALDH16A1脱酶16家庭A1抗体小鼠绒膜促性腺激素(CG)ELISA试剂盒7206760
ALG11天门冬酰连接糖化11抗体小鼠二(MDA)ELISA试剂盒90266
ALS2CR4肌萎缩侧索硬化症相关蛋白4抗体小鼠超化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒57669
AMIGO3粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体小鼠C肽(CPeptide)ELISA试剂盒23288495
AMN1细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA试剂盒2455143
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验SE 活性部分远低于50%（AlexaFluor488微量标记试剂盒产品信息，Invitrogen）。相反，所有Biotium 的CF染料具有相对稳定的胺活性的SE基团型，这比大部分AlexaFluor 染料的SE更耐水解。总体来说，CF染料SE产品一贯的给出更高的标记效率，提供给用户更好的使用价值。选择方案：蓝色（350-450nm处激发） CF 350、Alexa Fluor 350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发CF350是类似于Alexa Fluor 350和传统荧光染料AMCA的蓝色荧光
%TritonX-100的PBS配制的2%马血清溶液稀释的第一抗室温体孵育1小时。用足量的抗体溶液完全浸没切片，约150微升。提示,按照推荐方法稀释抗体。5. 吸去第一抗体并用150 μl 的PBS/TritonX-100缓冲液洗涤5次。6. 切片在湿盒中与相应的第二荧光抗体AlexaFluor488/555antibody（MolecularProbes）室温孵育1小时。二抗用含有0.05%TritonX-100的PBS配制的2%马血清溶液稀释，比例为1：300，用足够量的二抗溶液（约150 μl
碧云天凋亡试剂盒hoechst33258染色，他们认为细胞发生凋亡时，染色质会固缩。 所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞The image below shows human lymphoma cells treated with the chemotherapy agent camptothecin. The cells that are undergoing apoptosis appear yellow
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