Human CD14 ELISA Kit

碧云天的Human CD14 ELISA Kit (Human CD14 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人CD14酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的CD14的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为29pg/ml，与人的GM-CSF 、IL-4、TNF-α及小鼠的CD14、 IL-13等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
CD14是一种调节脂多糖与细胞相互作用的糖蛋白，在革兰氏阴性菌存在时发挥作用。CD14具有两种形式：游离CD14 (CD14)与膜结合CD14 (mCD14)。mCD14分子量为55kDa，根据糖基化程度和蛋白酶水解程度的不同，CD14变体的分子量在43kDa到53kDa之间变化。编码mCD14和CD14的基因并无明显差异。人CD14与小鼠、大鼠和兔CD14具有63%-73%的氨基酸同源性。
mCD14主要表达在一些骨髓细胞上，例如单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞，这些细胞通常对LPS具有较高的敏感性。CD14则主要调节LPS对那些不表达mCD14的细胞的作用，例如内皮细胞、表皮细胞和平滑肌细胞。在血浆和尿液中都能检测到CD14的存在。
LPS和CD14的结合需要急性时相蛋白、LPS结合蛋白(LBP)的参与。mCD14、CD14、LPS和LBP之间的联系十分复杂。当LPS浓度较低时，LPS与CD14的结合一定需要LBP的参与；但是当LPS浓度较高时，LBP有可能会抑制LPS与CD14的结合。另外CD14会与mCD14竞争LPS，并且有助于LPS的清除。因此这四个因子共同参与了复杂的免疫调节反馈机制。LPS与CD14的结合会促进炎性细胞因子和炎性相关蛋白的产生，但具体信号传递机制尚不清楚。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人CD14的浓度，其原理见图1。人CD14特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人CD14会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人CD14抗体后，生物素化抗人CD14抗体与人CD14结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人CD14浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人CD14浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PC168-1	人CD14抗体预包被板	8孔×12条
PC168-2	标准品稀释液(5X)	20ml
PC168-3	人CD14标准品	4-8瓶
PC168-4	人CD14生物素化抗体(100X)	100μl
PC168-5	人CD14生物素化抗体稀释液	10ml
PC168-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PC168-7	洗涤液(20X)	30ml
PC168-8	TMB溶液	10ml
PC168-9	终止液	5ml
PC168-10	封板膜(透明)	2张
PC168-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。