Human SOST/Sclerostin ELISA Ki

碧云天的Human SOST/Sclerostin ELISA Kit (Human SOST/Sclerostin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人骨硬化蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的SOST/Sclerostin 的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为41.5pg/ml，与人BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7等均没有交叉反应，与小鼠SOST蛋白有30%交叉反应性，板内、板间变异系数均小于10%。
骨硬化蛋白(Sclerostin)，又称SOST，属于Cerberus/DAN家族成员，是维持骨稳态的重要调节因子。Cerberus/DAN蛋白家族成员包括Cerberus、DAN、Gremlin、PRDC、SOST和Caronte，均属于分泌型糖蛋白，是骨形成蛋白的拮抗剂。SOST通常以单体形式分泌，成熟的人SOST与小鼠和大鼠SOST分别具有89%和92%的氨基酸同源性。SOST基因的失活突变会导致硬化性骨化病和van Buchem疾病，表现出骨骼发育异常。SOST主要由成骨细胞、软骨细胞和牙骨质细胞表达，BMP-2、BMP-4和BMP-6能够诱导SOST的表达，相反甲状旁腺激素则会抑制SOST的表达。
SOST能够与BMP-2、BMP-4、BMP-6和BMP-7结合，从而抑制BMPs介导的成骨细胞分化过程。SOST与IRP-5和LRP-6结合还能够抑制Wnt信号通路。同时，SOST还能够调节BMPR-IA信号通路的活性。在体外实验中，SOST的这些特性能够有效抑制骨形成。SOST可以抑制间充质干细胞的增殖，增加其凋亡。此外，SOST还可以抑制成骨前体细胞的分化，影响成骨细胞介导的骨矿化作用。当出现骨密度降低、畸形性骨炎、骨髓瘤和前列腺癌骨转移时，SOST的循环浓度会有所增加。同时在慢性肾病晚期、酒精肝、II型糖尿病患者中SOST的表达也会上调。血液中SOST与甲状旁腺激素和皮质醇浓度呈现负相关，然而与游离的T3和T4甲状腺激素浓度则呈正相关。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人SOST的浓度，其原理见图1。人SOST特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人SOST会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人SOST抗体后，生物素化抗人SOST抗体与人SOST结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人SOST浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人SOST浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PS835-1	人SOST/Sclerostin抗体预包被板	8孔×12条
PS835-2	样品分析缓冲液	5ml
PS835-3	标准品稀释液	10ml
PS835-4	人SOST/Sclerostin标准品	2-4瓶
PS835-5	人SOST/Sclerostin生物素化抗体	10ml
PS835-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PS835-7	洗涤液(20X)	30ml
PS835-8	TMB溶液	10ml
PS835-9	终止液	5ml
PS835-10	封板膜(透明)	2张
PS835-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。