Human IL-5 ELISA Kit

碧云天的Human IL-5 ELISA Kit (Human Interleukin-5 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素5酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-5的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为12.8pg/ml，与人的GM-CSF、IL-3，小鼠IL-5等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
白细胞介素5 (Interleukin-5, IL-5)是一种分泌型糖蛋白，属于α-螺旋细胞因子家族，该家族成员还包括IL-3和GM-CSF。与家族其它成员不同，IL-5以反向平行二聚体形式存在，单体间由两个链内二硫键所形成的共价键相连。IL-5主要由CD4⁺Th2细胞产生，嗜酸性粒细胞和肥大细胞也能分泌少量IL-5。IL-5能够增加嗜酸性粒细胞和CD34⁺祖细胞的产生和调动，Th2细胞和肥大细胞产生的IL-5还能够促进骨髓外嗜酸性粒细胞祖细胞的成熟。人IL-5与小鼠IL-5具有70%的氨基酸同源性。
人IL-5受体由两部分组成，一部分是特有的配体结合亚基IL-5 Rα，另一部是通用的信号传导亚基βc，该亚基同时也是IL-13和GM-CSF的受体组成部分。两种亚基都属于细胞因子受体亚族成员。IL-5 Rα首先以低亲和力与IL-5结合，随后与βc二聚体结合形成高亲和力受体。IL-5同样能与蛋白聚糖结合，结合后能够增加IL-5的生物活性。除了膜绑定的IL-5 Rα亚基外，还存在游离型的IL-5 Rα。游离IL-5 Rα亚基的mRNA主要存在于人CD34⁺脐带细胞中，但是当受到IL-5刺激以及在嗜酸性粒细胞分化时，跨膜形式的IL-5 Rα表型会增多。当出现嗜酸性粒细胞增多症时，两种亚型的IL-5 Rα表达都会上调。用IL-5处理成熟的嗜酸性粒细胞会造成细胞表面IL-5 Rα表达下调，降低细胞对IL-5的响应能力。在体外，游离IL-5 Rα表现出IL-5的拮抗作用。IL-5 Rα主要表达在嗜酸性粒细胞上，但在嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面也有少量表达。
在人体内，IL-5主要作用于嗜酸性粒细胞，促进其分化、成熟、活化、迁移和存活。但当小鼠出现IL-5基因缺失时，体内嗜酸性粒细胞数量及活性仅表现为减少和降低，而并非完全消失，这可能是由于IL-3、GM-CSF和Eotaxin同样能够促进嗜酸性粒细胞的扩增和迁移。在过敏性气喘中，IL-5能够促进嗜酸性粒细胞在肺部的浸润，加重病情，但当给予IL-5抗体时，并未取得明显的临床疗效。然而在嗜酸性粒细胞增多症中，给予IL-5抗体后，体内嗜酸性粒细胞数减少了50%。另外，IL-5还能够作为嗜碱性粒细胞的分化因子，协助组胺和白三烯分泌。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人IL-5的浓度，其原理见图1。人IL-5特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IL-5会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人IL-5抗体后，生物素化抗人IL-5抗体与人IL-5结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人IL-5浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人IL-5浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PI625-1	人IL-5抗体预包被板	8孔×12条
PI625-2	样品分析缓冲液	5ml
PI625-3	标准品稀释液	10ml
PI625-4	人IL-5标准品	2-4瓶
PI625-5	人IL-5生物素化抗体	10ml
PI625-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PI625-7	洗涤液(20X)	30ml
PI625-8	TMB溶液	10ml
PI625-9	终止液	5ml
PI625-10	封板膜(透明)	2张
PI625-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。