Human FGF-21 ELISA Kit

碧云天的Human FGF-21 ELISA Kit (Human Fibroblast Growth Factor 21 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人成纤维细胞生长因子酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的FGF-21的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为18.65pg/ml，与人的FGF-19、FGF-23、Klotho等均没有交叉反应，与小鼠FGF-21可以交叉识别。板内、板间变异系数均小于10%。
成纤维细胞生长因子21 (Fibroblast Growth Factor 21, FGF21)属于FGF家族，根据结构特性其属于FGF-19亚族，该亚族中还包括FGF-19和FGF-23成员。FGF家族成员大都具有一个氨基酸长度为120的核心FGF区域，该区域具有β-trefoil结构。FGF-19亚族成员与其他FGFs不同，其并不含有β-trefoil结构，并且也不能与肝素等细胞外基质分子牢固结合。因此，FGF-19亚族成员与其它FGFs相比更容易扩散。FGF-19亚族成员利用辅助受体klotho家族直接与FGF受体结合，参与调控代谢相关过程。FGF-21利用C端序列与β-Klotho结合，从而传递信号。成熟的人FGF-21与小鼠和大鼠FGF-21具有81%的氨基酸同源性。
当PPARα/RXR复合物受到游离脂肪酸刺激后，会刺激肝细胞产生FGF-21。FGF-21分泌后，会诱导白色脂肪组织分泌游离脂肪酸，随后游离脂肪酸在肝脏发生氧化，最终产生乙酰辅酶A，随后乙酰辅酶A与一些4碳酮结合，参与能量生成。另外在脂肪组织中，FGF-21与PPARγ协同作用，产生更多的葡萄糖转运体，从而增加葡萄糖摄取。FGF-21能够穿过血脑屏障，并造成精神迟缓，缺乏活力，在禁食或冬天时这会造成类似于冬眠的现象出现。在db/db和ob/ob小鼠中，FGF-21能够调整葡萄糖和甘油酸三酯的值恢复到接近正常的水平，并增加胰岛素的敏感性。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人FGF-21的浓度，其原理见图1。人FGF-21特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人FGF-21会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人FGF-21抗体后，生物素化抗人FGF-21抗体与人FGF-21结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin
)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人FGF-21浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人FGF-21浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PF313-1	人FGF-21抗体预包被板	8孔×12条
PF313-2	样品分析缓冲液	5ml
PF313-3	标准品稀释液	10ml
PF313-4	人FGF-21标准品	2-4瓶
PF313-5	人FGF-21生物素化抗体	10ml
PF313-6	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PF313-7	洗涤液(20X)	30ml
PF313-8	TMB溶液	10ml
PF313-9	终止液	5ml
PF313-10	封板膜(透明)	2张
PF313-11	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。