- ¥980
- Affinity Biosciences
- KF005
- 2025年07月16日
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- 技术资料
- 库存：
9999
- 英文名：
ECL Western Blotting Substrate (PG&FG Grade)
- 保存条件：
4度
- 规格：
100ml
双敏化学发光试剂(ECL Reagent)(皮克+飞克)
一、用途：
本试剂是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白。用X光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光，便于反复曝光操作，免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。
二、原理：
辣根过氧化酶使试剂中的发光物（Luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离，并转移到固相膜上（如NC、PVDF等），经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光胶片(放射自显影片)感光记录下来。
三、使用方法：
1. 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，在与HRP交联物温育后，膜片更需仔细洗涤，所有步骤均在室温下完成。
2. 化学发光试剂的配置 在使用前等量混合Ⅰ液和Ⅱ液，混合后尽快使用。注意Ⅱ液包括皮克级和飞克级，根据实验效果二选一，建议初次选用皮克级Ⅱ液，若要增强效果可用飞克级Ⅱ液。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。
3.蛋白信号显现
1). 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂，置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡。
2). 将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中于暗室中压上X光片。
3).根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般皮克级为1-5min,飞克级为1-10s，也可选择不同时间多次压片，以达最佳效果。显影冲洗。
4). 调节曝光时间，再次曝光显影。
4、膜的重复使用：
配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巯基乙醇的溶液，膜放入后，70℃振荡水浴30分钟。再用TBST或PBST缓冲液洗脱，最后用脱脂牛奶封闭。
四、操作注意：
1. 加入一抗后膜不能再干燥；
2. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要；
3. 使用前配置化学发光试剂，配置足够覆盖膜片即可，弃去使用过的混合试剂；
4. 使用干净取样头取用每种试剂；
5. 第一张片子建议曝光5s，观察结果后判断最佳曝光时间可1秒至5min不等；
6. 除了放射自显影片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作；
7. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体，再次印迹使用，它不像生色物质需要从膜片上清除底物。
8. NaN3能抑制HRP活性，应避免使用NaN3。
五、安全性：
无特殊毒性，按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触，请立刻用大量清水冲洗。
六、储存：
2-8℃密封避光保存一年，切勿冷冻保存。
一、用途：
本试剂是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白。用X光片可快速地获得永久的硬拷贝结果。所含独特的底物足以维持12小时以上的发光，便于反复曝光操作，免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用。适用于痕量蛋白或核酸检测。
二、原理：
辣根过氧化酶使试剂中的发光物（Luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离，并转移到固相膜上（如NC、PVDF等），经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光胶片(放射自显影片)感光记录下来。
三、使用方法：
1. 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，在与HRP交联物温育后，膜片更需仔细洗涤，所有步骤均在室温下完成。
2. 化学发光试剂的配置 在使用前等量混合Ⅰ液和Ⅱ液，混合后尽快使用。注意Ⅱ液包括皮克级和飞克级，根据实验效果二选一，建议初次选用皮克级Ⅱ液，若要增强效果可用飞克级Ⅱ液。将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片。
3.蛋白信号显现
1). 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂，置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡。
2). 将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中于暗室中压上X光片。
3).根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般皮克级为1-5min,飞克级为1-10s，也可选择不同时间多次压片，以达最佳效果。显影冲洗。
4). 调节曝光时间，再次曝光显影。
4、膜的重复使用：
配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巯基乙醇的溶液，膜放入后，70℃振荡水浴30分钟。再用TBST或PBST缓冲液洗脱，最后用脱脂牛奶封闭。
四、操作注意：
1. 加入一抗后膜不能再干燥；
2. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要；
3. 使用前配置化学发光试剂，配置足够覆盖膜片即可，弃去使用过的混合试剂；
4. 使用干净取样头取用每种试剂；
5. 第一张片子建议曝光5s，观察结果后判断最佳曝光时间可1秒至5min不等；
6. 除了放射自显影片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作；
7. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体，再次印迹使用，它不像生色物质需要从膜片上清除底物。
8. NaN3能抑制HRP活性，应避免使用NaN3。
五、安全性：
无特殊毒性，按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触，请立刻用大量清水冲洗。
六、储存：
2-8℃密封避光保存一年，切勿冷冻保存。
| 组分 | 规格 |
| 溶液 Ⅰ | 50 ml |
| 溶液 Ⅱ 皮克级 | 25 ml |
| 溶液 Ⅱ 飞克级 | 25 ml |
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