Caspase-6活性测定试剂盒说明书

【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：Caspase-6活性测定试剂盒说明书
英文名称：Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit
产品规格：20T|50T|100T
发货周期：1～3天
本试剂盒测定哺乳动物组织、细胞caspase-6活性。试剂盒测定原理基于Caspase-6特异水解其多肽底物Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide)，释放出游离的硝胺pNA，后者呈黄色在405nm具有最大吸收峰，用可见光分光光度比色方法测定。其吸光度值对应于Caspase-6的水解活性。
Caspase-6也称Mch-2，其前体蛋白被granzymeB剪切后形成活化的caspase-6二聚体，可诱导细胞凋亡。细胞凋亡属于程序化细胞死亡，可见于各种器官和细胞，在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-6也称Mch-2，其前体蛋白被granzymeB剪切后形成活化的caspase-6二聚体，可诱导细胞凋亡。Caspase-6可剪切凋亡的关键调节蛋白PARP，剪切核膜上关键蛋白LaminA，其对于LaminA的识别位点是VEID。
运输及保存试剂常温运输。到达后按要求储存，1年内稳定。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 AZD8931 (Sapitinib)γ-谷酰-3-羟-4-单盐/γ-谷酰-3-羧-4-单盐/γ-GT/GGTP
 Foretinib (GSK1363089)螯合铁/10% Iron chelate
 Motesanib Diphosphate (AMG-706)N,N-二琥珀酰亚碳酯/N,N-琥珀酰亚碳酯/N,N-琥珀酰碳酯/N,N-碳二琥珀酰亚/DSC
 (1R,2R)-N,N'-二羟-N,N'-双(二酰)-1,2-二O-酰-L-丝盐盐/O-酰-L-化丝/O-Acetyl-L-serine hydrochloride
 Medetomidine树脂/Merrifield resin
 Medetomidine HClBOC-Nim-苄-L-组/BOC-Nim-benzyl-L-Histidine
 Empagliflozin (BI 10773)L-组盐盐一水物/盐组/L-组一水物/L-Histidine HCL H2O
 Mildronate dihydrateL-组盐盐/盐组/L-组/L-Histidine HCL
 人、鼠 促肾上腺皮质激素释放因子DL-组盐盐/DL-组/DL-Histidine HCL
 CarfilzomibDL-组/(±)-2--3-(4-咪唑)/DL-2--3-(1H-咪唑-4-)/DL-Histidine
Caspase-6活性测定试剂盒说明书1PYRENEBUTYRIC ACID1芘3443456
2,3Dichlorobenzoyl chloride2,3二酰2905604
URIDINE3''MONOPHOSPHORIC ACID DISODIUM SALT尿苷3二
3BENZOYLPROPIONIC ACID3酰2051958
HALAPNA HCL4L31796551
Docosanoic acid山俞112856
2Nitrobenzoyl chloride2酰610140
NAMIU培养
2ACETYLDIMEDONE2酰5,5二1,3环二1755153
LIsoleucine allyl ester ptoluenesulfonate saltL异亮对88224059
4Bromo1,2(methylenedioxy)benzene4溴1,2亚二2635134
6,13Pentacenequinone6,13五并醌3029321
2FLUORO5METHYLPHENYLBORONIC ACID25166328161
3Amino6bromopyridine36溴13534979
BOCMET(O)OHN叔羰L蛋亚砜34805215
花椒 2009247 订购|咨询  规格 20mg
牛鹅去胆 516358 订购|咨询  规格 20mg
夏枯草  订购|咨询  规格 1g
北豆根  订购|咨询  规格 1g
川陈皮素 10236472 订购|咨询  规格 20mg
红花苷Ⅱ  订购|咨询  规格 20mg
豨莶草（豨莶）  订购|咨询  规格 2g
来曲唑  订购|咨询  规格 100mg
喷妥  订购|咨询  规格 100mg
右旋糖分子量D4  订购|咨询  规格 0.2g/支
参皂苷Rd  订购|咨询  规格 20mg
猪胰岛素（仅限HPLC使用）  订购|咨询  规格 15mg/支
第二代HCV RNA国家参考品  订购|咨询  规格 21支/套
瓜蒌（栝楼）  订购|咨询  规格 2g
鹿茸（梅花鹿）  订购|咨询  规格 0.4g
操作步骤(仅供参考)：
1、Caspase-6活性测定试剂盒说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。