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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
45
- 英文名:
Copper-ATPase assay kit
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100管/50样
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称:铜-ATP酶测定试剂盒(比色法)规格
英文名称:Copper-ATPase assay kit
产品规格:100管/50样
发货周期:1~3天
发货周期:1~3天
检测指标:铜-ATP酶;Cu-ATPase
本试剂盒可测各种动物组织、培养细胞等样本中的Cu2+- ATP酶活性。ATP酶存在于细胞膜及细胞器膜上,在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用,机体在缺O2及一些疾病状态下,此酶活力发生一系列改变。另外有些遗传疾病也与此酶活力的高低有关。ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷,测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。Cu2+-ATPase酶是一种能被钾激活而可被钒酸抑制的酶。
ATP酶存在于组织细胞膜及细胞器膜上,是生物膜上的一种蛋白酶,它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用,机体在缺O2及一些疾病状态下,此酶活力发生一系列改变,另外有些遗传疾病也与此酶活力的高低有关。
优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
5、回收试验: X =96%。
2、取样量微:本法取样本量100l。
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
4、再现性好:变异系数CV=1.7%。
5、回收试验: X =96%。
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
7、测试面广:可测动物组织、红细胞以及各种培养细胞、各种水产等,效果均佳。
操作步骤(仅供参考):
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
铜-ATP酶测定试剂盒(比色法)规格待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
Babesia perroncitoi柏氏巴贝斯虫PCR试剂盒48T/96TELISAKitforCollagenTypeVAlpha2(COL5a2)李氏增肉汤(LB1,LB2)础
Babesia perroncitoi柏氏巴贝斯虫染料法荧光定量PCR试剂盒48T/96TELISAKitforCytochromeP4501A2(CYP1A2)七叶苷培养
Babesia perroncitoi柏氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒48T/96TELISAKitforC1qAndTumorNecrosisFactorRelatedProtein9(C1QTNF9)半固体动力培养Adiponectin receptor 2HinfI, HC10000 units猪白介素13(IL-13)免疫试剂盒
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Roburicacid规格:HPLC≥98%,标准品ANKMY1MboII1500 units猪白介素1(IL-1)免疫试剂盒
ROBININ规格:>98%,标准品ANKRD13BBspTI (AflII)1000 units猪白蛋白免疫试剂盒
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RNA规格:>90%,BRANKRD20A3BseGI (BtsCI)500 units猪γ淀粉酶(AMY)免疫试剂盒
铜-ATP酶测定试剂盒(比色法)规格Annexin A2萝卜硫素
Annexin A1硫酸长春
Mullerian Inhibiting Substance;Anti-Mullerian hormone芒果苷
Glycodelin紫菀
λ-IgLC川翠定
κ-IgLC银杏酚酸
Immunobulin Binding Protein异麦角甾苷
λFLC酰紫堇灵
κFLC独活素
Immunoglobulin M安格洛苷C
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验比色杯比色杯也叫样品池,吸收器或比色皿,用来盛溶液,各个杯子壁厚度等规格应尽可能完全相等,否则将产生测定误差。玻璃比色杯只适用于可见光区,在紫外区测定时要用石英比色杯。不能用手指拿比色杯的光学面,用后要及时洗涤,可用温水或稀盐酸,乙醇以至铬酸洗液(浓酸中浸泡不要超过15分钟),表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净。比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定。因为反应中的染料
蛋白样品后,为确保每个蛋白样品的上样量一致,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液,可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。 2. 电泳(Electrophoresis) (1) SDS-PAGE凝胶配制 SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制,也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒。该试剂
酶标仪:即酶联免疫检测仪(ELISA Reader)是酶联免疫吸附试验的专用仪器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来分析抗原或抗体的含量。ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250ul以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。酶联免疫吸附试验方法酶标朕免疫吸附试验方法简称酶标法,是标记技术中的一种,是从荧光抗体技术,同位素免疫技术发展而来的一种敏感,特异,快速并且能自动化的现代技术。酶标法的基本
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