一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)价格

【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)价格
英文名称：One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit
产品规格：20次|50次
发货周期：1～3天
本试剂盒提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现红色荧光的凋亡细胞。本试剂盒足够检测20个样品。
试剂盒组分
TdT酶—————————40μl
荧光标记液——————960μl
TdT酶稀释液(选用)———00μl
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNAladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidyl
Transferase,TdT)的催化下加上红色荧光探针Cy3(Cyanine3)标记的dUTP，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法检测细胞凋亡的原理。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 L-缬氨酸叔酯盐酸盐亚铁化钠/黄血盐钠/亚铁化钠十水物/黄色盐/Sodium hexacyanoferrate (II) decahydrate
 基3-硫酯亚硝钠/六硝基钴酸钠/Sodium hexanitrocobaltate
 2,3-二溴吡啶四水铬钠/四水铬酸二钠/四水铬酸二钠盐/四水四铬二钠/Sodium chromate tetrahydrate
 4-氟-3-铬钠/铬酸二钠/铬酸二钠盐/四铬二钠/Sodium chromate
 6-羟基-2-萘磺酸钠结晶碳酸钠/冰碱/结晶疏打/十水碳酸钠/洗涤碱/Sodium carbonate decahydrate
 2,4,5-三基噻唑硫酸钠/酸式钠/一水合硫酸钠/重硫酸钠/Sodium bisulfate monohydrate
 二基二硫代氨基酸锌铋酸钠/二水铋酸钠/偏铋酸钠/Sodium bismuthate
 邻基三氟锑酸钠/偏锑酸钠/Sodium antimonate
 N,N'-(4,4'-亚基二苯基)双马来酰亚胺铝酸钠/偏铝酸钠/铝钠/Sodium aluminate
 环己基双苯膦物硫酸钠/硫钠/Sodium thiocyanate
一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)价格间充质干细胞培养基  规格20mg  Mouse Myosin ELISA Kit
间充质干细胞软骨细胞分化培养基  规格20mg  Mouse Myoglobin ELISA Kit
上皮细胞培养基  规格20mg  Mouse Tn-T ELISA Kit
角质细胞培养基  规格20mg  Mouse Troponin I ELISA Kit
成纤维细胞培养基  规格20mg  Mouse Activin A ELISA Kit
间充质干细胞培养基  规格20mg  Mouse Acti-vated protein C ELISA Kit
内皮细胞培养基  规格20mg  Mouse cAMP ELISA Kit
平滑肌细胞培养基  规格10mg  Mouse Cyclic guanosine monophosphate ELISA Kit
平滑肌细胞培养基  规格10mg  Mouse Cyclosporin A ELISA Kit
周边细胞培养基  规格10mg  Mouse Erythropoietin soluble receptor ELISA Kit
脑膜细胞培养基  规格10mg  Mouse Erythropoietin ELISA Kit
神经细胞培养基  规格20mg  Mouse Actinin α ELISA Kit
少突胶质前体细胞培养基  规格20mg  Mouse anti-melanocyte ELISA Kit
球状少突细胞培养基  规格20mg  Mouse receptor activator of nuclear factor kappaB ligand ELISA Kit
少突胶质细胞培养基  规格20mg  Mouse PPAR-γ ELISA Kit
操作步骤(仅供参考)：
1、一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(红色荧光)价格贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。