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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100T
操作步骤(仅供参考)：
1、Hoechst 33342/PI双染试剂盒哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：Hoechst 33342/PI双染试剂盒哪家好
英文名称：Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
产品规格：100T
发货周期：1～3天
Hoechst33342/PI双染试剂盒（Hoechst33342/PIDoubleStainKit）采用Hoechst33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是细胞核荧光染料Hoechst33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。
经上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋弱蓝色荧光。
本试剂盒染色快速方便，可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可达105-106个。
注意事项
1)Hoechst33342、PI对人体有害，请注意适当防护；
2)Hoechst33342、PI需避光，整个实验过程尽量避光操作；
3)荧光染料均存在淬灭情况，建议染色后需尽快检测；
4)Hoechst33342与细胞孵育时间不宜过长，一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
5)如果用于组织样品检测，则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
6)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件-20℃，有效期12个月
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
利度卡因F型微孔滤膜/Millipore filter（F type）,聚偏烯膜，有机相使用
钙 (metals basis)微孔滤膜（混纤）/Millipore filter，水相使用
2--3-氧封板膜/Microplate Sealers
2--6-氧封口膜/封口薄膜/Parafilm
1-(3--4-羟）尼龙膜N+/Hybond-N+
2,5-二对二PVDF膜/二树脂膜/Polyvinylidene Fluoride Membrane
四()锆纤维素薄膜/纤维素膜/纤维素膜/纤膜/Cellulose acetate layer sheets
4-[()]啶-1-叔酯纤维素薄膜/纤维素膜/NC/Nitroate cellulose sheets
N-Boc-D-beta-脯醇透析袋夹/Dialysis tubing closures
去铁交袋/Seal-A-Meal
Hoechst 33342/PI双染试剂盒哪家好琥珀胆标准品 Succinylcholine Chloride CAS71272
琥珀/二标准品 Succinic Acid CAS110156
甜菊糖标准品 Stevioside CAS57817897
硬脂标准品 Stearyl Alcohol CAS112925
硬脂酰聚甘油酯标准品 Stearoyl Polyoxyglycerides CAS
硬脂标准品 Stearic Acid CAS21128
司他夫定标准品 Stavudine CAS3056175
康力龙标准品 Stanozolol CIII CAS10418038
角鲨标准品 Squalane CAS111013
螺内酯标准品 Spironolactone CAS19000
盐大观霉素标准品 Spectinomycin Hydrochloride CAS22189328
盐索他洛尔标准品 Sotalol Hydrochloride CAS959240
山梨标准品 Sorbitol CAS50704
山梨标准品 Sorbic Acid CAS110441
生长激素标准品 Somatropin CAS12629015
维生素H 进口、国产 DBiotin 含量IND
维生素12 进口、国产 VB12 含量75%
胃素 进口、国产 Pepsin（porcinestomachmucose） 含量生物技术级，300u/mg
蜗牛酶 进口、国产 Snailase 含量BR，300u/mg，悬浮
蜗牛凝集素 进口、国产 Snailagglutinin 含量BR，Ⅰ型，>125CDU/mg
沃来西脱蓝B 进口、国产 OracetblueB 含量BS
乌美司 进口、国产 Bestatin 含量USP级，95%，900mcg/mg
钨硅 进口、国产 Silicotungsticacidhydrate 含量86.5%
钨 进口、国产 Tungsten 含量99.7%
钨 进口、国产 Potassiumtungstate 含量95%
1、Hoechst 33342/PI双染试剂盒哪家好贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：Hoechst 33342/PI双染试剂盒哪家好
英文名称：Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
产品规格：100T
发货周期：1～3天
Hoechst33342/PI双染试剂盒（Hoechst33342/PIDoubleStainKit）采用Hoechst33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是细胞核荧光染料Hoechst33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。
经上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋弱蓝色荧光。
本试剂盒染色快速方便，可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可达105-106个。
注意事项
1)Hoechst33342、PI对人体有害，请注意适当防护；
2)Hoechst33342、PI需避光，整个实验过程尽量避光操作；
3)荧光染料均存在淬灭情况，建议染色后需尽快检测；
4)Hoechst33342与细胞孵育时间不宜过长，一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
5)如果用于组织样品检测，则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
6)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件-20℃，有效期12个月
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
利度卡因F型微孔滤膜/Millipore filter（F type）,聚偏烯膜，有机相使用
钙 (metals basis)微孔滤膜（混纤）/Millipore filter，水相使用
2--3-氧封板膜/Microplate Sealers
2--6-氧封口膜/封口薄膜/Parafilm
1-(3--4-羟）尼龙膜N+/Hybond-N+
2,5-二对二PVDF膜/二树脂膜/Polyvinylidene Fluoride Membrane
四()锆纤维素薄膜/纤维素膜/纤维素膜/纤膜/Cellulose acetate layer sheets
4-[()]啶-1-叔酯纤维素薄膜/纤维素膜/NC/Nitroate cellulose sheets
N-Boc-D-beta-脯醇透析袋夹/Dialysis tubing closures
去铁交袋/Seal-A-Meal
Hoechst 33342/PI双染试剂盒哪家好琥珀胆标准品 Succinylcholine Chloride CAS71272
琥珀/二标准品 Succinic Acid CAS110156
甜菊糖标准品 Stevioside CAS57817897
硬脂标准品 Stearyl Alcohol CAS112925
硬脂酰聚甘油酯标准品 Stearoyl Polyoxyglycerides CAS
硬脂标准品 Stearic Acid CAS21128
司他夫定标准品 Stavudine CAS3056175
康力龙标准品 Stanozolol CIII CAS10418038
角鲨标准品 Squalane CAS111013
螺内酯标准品 Spironolactone CAS19000
盐大观霉素标准品 Spectinomycin Hydrochloride CAS22189328
盐索他洛尔标准品 Sotalol Hydrochloride CAS959240
山梨标准品 Sorbitol CAS50704
山梨标准品 Sorbic Acid CAS110441
生长激素标准品 Somatropin CAS12629015
维生素H 进口、国产 DBiotin 含量IND
维生素12 进口、国产 VB12 含量75%
胃素 进口、国产 Pepsin（porcinestomachmucose） 含量生物技术级，300u/mg
蜗牛酶 进口、国产 Snailase 含量BR，300u/mg，悬浮
蜗牛凝集素 进口、国产 Snailagglutinin 含量BR，Ⅰ型，>125CDU/mg
沃来西脱蓝B 进口、国产 OracetblueB 含量BS
乌美司 进口、国产 Bestatin 含量USP级，95%，900mcg/mg
钨硅 进口、国产 Silicotungsticacidhydrate 含量86.5%
钨 进口、国产 Tungsten 含量99.7%
钨 进口、国产 Potassiumtungstate 含量95%
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文献和实验相关实验
发现Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。Hochest/PI双染 astra: 请问用hoechst33258可以和PI进行双染可以么？查了很多实验手册，都是单染，由于没有经验，所以能不能麻烦你提供双染的实验流程？ midas: 当然可以。以下步骤供参考： 1、向细胞中加入用0.01MPBS溶解的Hoechst33342，终浓度为10μg/ml，37℃反应10min； 2、继续加入用0.01MPBS溶解的PI，使它的终浓度为10μg/ml，4℃反应20min； 3、直接
韶光逐浅 我想问一下Hoechst凋亡染色试剂盒国产的哪个公司的好啊？ yunitongxing 原装进口试剂 韶光逐浅 好的，多谢啦 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。 5. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。 6. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。 7. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 二、悬浮细胞 1. 离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内，加入0.5 ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。 2. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次
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