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60
- 英文名：
Pepsin assay kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
详见说明书
英文名称：Pepsin assay kit
产品规格：50管/24样
发货周期：1～3天
发货周期：1～3天
检测指标：胃蛋白酶
胃蛋白酶可水解蛋白产生含酚的氨基酸，而酚试剂可被含酚的氨基酸还原成蓝色物质，通过比色本试剂盒可测各种动物胃液、胃组织等样本中胃蛋白酶活性。胃蛋白酶原由胃底主细胞分泌，在pH1.5～5.0条件下，被活化成胃蛋白酶，将蛋白质分解为胨，一部分被分解为酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸。胃液胃蛋白酶测定可用于鉴别神经性低酸症和胃性低酸症，当胃酸过少或缺乏时，前者胃蛋白酶的含量有时正常而后者盐酸与胃蛋白酶同时缺乏。一般认为胃性低酸症是由于胃粘膜的重症器质性变化所致，特别是对于机体患有恶性贫血、无酸症、无胃蛋白酶分泌的研究具有重要的参考意义。胃癌、萎缩性胃炎、慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二脂肠炎、恶性贫血以及甲状腺功能减退等胃蛋白酶的分泌常减少。一般胃酸基础分泌高的，如十二脂肠溃疡等，胃蛋白酶活性增高。
优点如下：
1、稳定性好：试剂盒2～8℃存放3个月有效。
2、再现性好：变异系数CV=1.7%。
3、回收试验： X =104%。
4、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
5、测试范围：可测动物胃液、组织等。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．胃蛋白酶测定试剂盒(比色法)价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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connective tissue growth factor柯里拉京
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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的技术支持，人家说六孔板细胞量不够，不知道您六孔板细胞量够吗？还有您后来做出来的结果咋样?有啥改进的地方没？好愁呀，希望得到您的帮助。急着毕业呀！ bin1986 我用的是悬浮细胞，接板密度大于10e6个，用的量完全够。如果这样子的话可能是你的化合物并没有激活casp-3吧 darcy913 你好，你以前应该用过caspase-3比色法检测试剂盒吧，虽然是很久以前的事了，用的是哪家公司的？效果怎么样？我用的是碧云天的，完全没
碧云天凋亡试剂盒hoechst33258染色，他们认为细胞发生凋亡时，染色质会固缩。 所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞The image below shows human lymphoma cells treated with the chemotherapy agent camptothecin. The cells that are undergoing apoptosis appear yellow
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