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20次/50次
| 规格: | 20次 | 产品价格: | ¥1505.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50次 | 产品价格: | ¥2669.0 |
碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织,只要经过一步染色反应,洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现红色荧光的凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上红色荧光探针Cy3(Cyanine 3)标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。(1)高灵敏度:背景染色极低,阳性染色明亮,可以在单细胞水平检测到细胞凋亡,同时由于凋亡早期就有DNA断裂,可以检测到早期的细胞凋亡。(2)特异性:TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞,而不容易标记坏死细胞。(3)快速:仅需约1-2个小时即可完成。(4)方便:只需一步染色反应,洗涤后即可观察,不必使用二抗等进行多步操作。(5)应用范围广:可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。(6) 实测效果好:参考图1。

图1. 本试剂盒的检测效果图。A. HeLa细胞未经处理或用DNase I室温孵育10分钟后的检测效果图。B. HeLa细胞未经处理或用10μM喜树碱(Camptothecin)处理24小时后的检测效果图。图中的红色荧光为TUNEL染色阳性细胞。本图中的染色实验均在12孔板中进行。本图仅作参考,不同的样品不同的检测条件,实际获得的结果可能有较明显的差别。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。
本试剂盒足够检测50个样品。
包装清单:
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C1090-1 | TdT酶 | 250μl |
| C1090-2 | 荧光标记液 | 2× 1.2ml |
| C1090-3 | TdT酶稀释液(选用) | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存,荧光标记液需避光保存。
注意事项:
需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS,用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126),用于固定的4%多聚·甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098),同时需自备含0.3% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色强力通透液(P0097)。
如果用于石蜡切片的检测,需自备蛋白酶K,二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型,绿色荧光)为例) TUNEL检测:使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min,再使用二甲苯脱蜡2次,每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗,便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡,其中 TUNEL 法做的最多,我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司,结果大多数成功,偶尔也有失败,下面我把实验中的关键问题与大家共享一下,同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理:对不同组织切片先增加细胞膜通透性,然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内,在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合,再用 HRP 标记的链霉
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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