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上海邦景
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低温冷藏
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1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg
产品名称:NF-κB抑制剂(Neferine)规格
英文名称:Neferine
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg
发货周期:1~3天
Neferine是一个生物碱,有抗心律失常,降压的特性,也是NF-κB的抑制剂。
注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!
CAS号:2292-16-2
别名:(-)-Neferine
纯度:99.92%
分子式:C₃₈H₄₄N₂O₆
分子量:624.77
储存条件:-20℃避光,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。
注意事项:
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
操作步骤:
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
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文献和实验一氧化氮( NO )信号通路研究一氧化氮合酶( NOS )抑制剂研究背景:一氧化氮( NO )是自分泌和旁分泌的信号通路分子,可以扩散进入生物膜。发挥作用时间很短(几秒钟),主要的生理功能是促进血管动态平衡。它能够抑制平滑肌收缩生长,阻止血小板凝聚以及防止白细胞 - 内皮细胞粘附。另外它还参与免疫防御系统,神经传递,血管生成等过程。 NO 的下游靶标包括鸟苷酸环化酶和 NF-κB ,前者可以提高 cGMP 水平,后者在 iNOS 基因
nunu4404 请问,哪位大侠知道有水溶性的nf-kb的阻断剂吗,名称是什么,在哪可以买到? 试过两种用DMSO溶的,MG-132和BAY-11-7082 。用DMSO溶解后,为到达所需药物浓度及保障DMSO浓度不超过有害标准,就又用生理盐水进行稀释,结果变成悬浮液,该怎么处理?难道用DMSO溶解的试剂就不能再用水稀释了吗,还是对稀释量有要求?急盼回复,谢谢! kateqy 如果能用生理盐水稀释的话,那最初为什么不用
配置n+1个体系。 4.4.2对照组: 1)阳性底物组:反应体系中不加选择性抑制剂,并将受试物换为阳性底物,其它组分加入量不变,缺少体积用0.1M PBS缓冲液补齐; 2)无抑制剂组:反应体系中不加选择性抑制剂,其它组分加入量不变,缺少体积用0.1M PBS缓冲液补齐; 无A、B液组:反应体系中不加A液和B液,其它组分加入量不变,缺少体积用0.1M PBS缓冲液补齐。 4.4.3结果计算: 采用底物消除法评价试验结果,用待测物的消除速率表示待测物在微粒体孵育体系中的代谢速率; 抑制
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