细胞活性氧ROS分析试剂盒(H2DCFDA绿色荧光探针)说明

【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：细胞活性氧ROS分析试剂盒(H2DCFDA绿色荧光探针)说明书
英文名称：Cells Reactive oxygen species Analysis Kit
产品规格：1000T
发货周期：1～3天
发货周期：1～3天
本试剂盒提供还原型具有细胞膜透性的ROS荧光探针衍生物。还原型与乙酰化形式的2'，7'-二氯荧光素（DCF）是无荧光的乙酸酯基团，在胞内可以被酯酶氧化或水解，从而脱去，生成带电荷形式的探针。利用合适的激发光源可以很方便地在各种检测平台上观察测量，如流式细胞仪、荧光酶标仪和荧光显微镜。由于染料很容易受到光氧化，在进行实验时必须必须全程注意避光。
相比较其非羧基衍生物，羧基-H2DCFDA带有额外的负电荷。羧基-H2DCFDA SE是带有一个氨基活性的琥珀酰亚胺酯基团,可与胞内成分以共价形式更持久的结合。
制备储液：
工作液必须新鲜配制，实验结束即可丢弃稀释过的多余探针，染料在水溶液中更容易氧化分解，请尽快用完。在最低探针加载浓度的条件下，本试剂盒提供的探针，可以满足切片或悬浮细胞（设置加载孵育液体积每个反应不超过2mL的情况下）至少1000 TESTS。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Cysticercus cellulosae猪囊尾蚴染料法荧光定量PCR试剂盒XDHTDRD3胰腺衍生因子抗体
Cysticercus cellulosae猪囊尾蚴探针法荧光定量PCR试剂盒XAGE2TIMM8A补体因子H抗体
Cytomegalovirus(CMV)巨细胞病毒PCR试剂盒XKR1TMEM158酸化Fas死亡结构域相关蛋白抗体
Cytomegalovirus(CMV)巨细胞病毒染料法荧光定量PCR试剂盒phospho-YWHAE(Thr232)TTBK2Fas相关1因子抗体
Cytomegalovirus(CMV)巨细胞病毒探针法荧光定量PCR试剂盒14-3-3 epsilonTransglutaminase 6酸化粘着斑激酶抗体
Prochlorperazine规格：>98%,BRphospho-SHC (Tyr317)英文名称TumstatinG蛋白偶联受体MRGX2蛋白抗体
ProcaterolHCl规格：>98.5%,CP2005,半水合物TRIM21英文名称TBX3G蛋白偶联受体RDC1蛋白抗体
ProcaterolHCl规格：含量测定Spectrin alpha chain, non-erythrocytic 1英文名称Phospho-TH (Ser31)G蛋白偶联受体TAS1R1蛋白抗体
ProcarbazineHCl规格：>98.5%,USP,BR,可用于细胞培养Substance P英文名称TCF3G蛋白偶联受体TGR7蛋白抗体
ProcarbazineHCl规格：HPLC>98%,标准品取代度80%99.95%(metalsbasis)25gp-P38MAPKAlisolB-23-acetateAnti-Phospho-p73(Tyr99)酸化P73肿瘤抑制基因抗体Anti-Phospho-p73(Tyr99)酸化P73肿瘤抑制基因抗体48T/96TSomatostatin Receptor 1英文名称phospho-TCF3(Thr355)G蛋白偶联受体GPR157蛋白抗体
细胞活性氧ROS分析试剂盒(H2DCFDA绿色荧光探针)说明书S100A62''-O-p-反式香豆酰...
protectin假人参皂苷RT1
caenorhabditis elegans death geneRaddeanoside 20
Calpain1前杯苋甾
Integrin β317-羟基 sprengerin...
Integrin β5知母皂苷A1
Integrin β4雷公藤春
Integrin Alpha 6去毛钩藤
Tissue inhibitor of metalloproteinase筋骨草甾C
neutrophil Hyaluronidase日当药黄素
操作步骤(仅供参考)：
1、细胞活性氧ROS分析试剂盒(H2DCFDA绿色荧光探针)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。