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        大鼠肌肝(Cr)酶联免疫分析(ELISA)

        互联网

        1294

        大鼠 肌肝(Cr 酶联免疫分析( ELISA

        试剂盒使用说明书

        本试剂盒仅供研究使用。

        药品名称:

        通用名: 大鼠 肌肝( Cr 酶联免疫 分析试剂盒

        使用目的:

        本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中 肌肝( Cr 含量。

        实验原理

        本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠 肌肝( Cr 水平。用纯化的大鼠 肌肝( Cr 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的 肌肝( Cr 标准品和未知浓度的 肌肝( Cr 待检样品, 温育后,加入生物素标记的抗 IgG 抗体, 再与链霉亲和素 -HRP 结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 肌肝( Cr 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠 肌肝( Cr 浓度。

        试剂盒组成

        1

        20 倍浓缩洗涤液

        50ml × 1

         

         

        9

        标准品 S1 48μ mol/L

        0.5ml × 1

        2

        链霉亲和素 -HRP

        6ml × 1

        标准品 S2 32 μmol/L

        0.5ml × 1

        3

        酶标包被板

        12 孔× 8

        标准品 S3 16 μmol/L

        0.5ml × 1

        4

        生物素标记的抗 -IgG 抗体

        6ml × 1

        标准品 S4 8 μmol/L

        0.5ml × 1

        5

        显色剂 A

        6ml × 1

        标准品 S5 mol/L

        0.5ml × 1  

        6

        显色剂 B

        6ml × 1/

        10

        密封袋

        1

        7

        终止液

        6ml × 1

        11

        封板膜

        3

        8

        样品稀释液

        6ml × 1

        12

        说明书

        1

         

        标本要求

        1 不能检测含NaN3的样品 ,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。

        2. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可 将标本放于 -20 保存,但 应避免反复冻融

        操作步骤

        1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

        2.       加样: 分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、 待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50μl 在样本反应孔中先加入待测样品 10μl 再加入样品稀释液 40μl (样品最终稀释度为 5 倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀, 37 温育 45 分钟。

        3.       配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用

        4.       洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 4 次,拍干。

        5.       加生物素标记的抗 -IgG 抗体:每孔加入生物素标记的抗 -IgG 抗体 50μl 37 温育 30 分钟

        6.       洗涤:操作同 4

        7.       加链霉亲和素 -HRP :每孔加入 50μl 的链酶亲和素 -HRP ,轻轻振荡混匀, 37 温育 30 分钟。

        8.       洗涤:操作同 4

        9.       显色:每孔先加入显色剂 A 50μl ,再加入显色剂 B 50μl ,轻轻震荡混匀, 37 避光显色15 分钟.

        10.   终止:每孔加终止液 50μl ,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

        11.   测定:以空白空调零, 450nm 波长依序测量各孔的吸光度( OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

         

        计算

            以标准物的浓度为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

        注意事项

        1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

        2 .浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

        3 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

        4.  如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先将样本稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数( ×5 ×n )。

        5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

        6 .本试剂不同批号组分不得混用。显色剂 B 请避光保存。

        7 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

        8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

        9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

        线形范围:

        mol/L -50 μmol/L

        规格:

        96 人份 /

        保存条件及有效期

        1 .试剂盒保存: 2-8

        2 .有效期: 6 个月

         

        上海越研生物科技有限公司
        www.biolzy.com

         

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