T175培养瓶正方斜口带滤膜175cm2Corning.说明书

T175培养瓶正方斜口带滤膜175cm2Corning.说明

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  • 邦景
  • BJ-10395
  • 进口、国产
  • 2025年07月14日
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      详见说明书

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      上海邦景

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

    公司优势:
    1. T175培养瓶正方斜口带滤膜175cm2Corning.说明书具有多年的销售经验和资深的行业背景,我司秉承质量优先的理念,重视自主创新,希望广大科研工作者与我司达成长期的合作关系;
    2.公司不仅与各大高校、科研机构以及研发性企业有着合作关系,还与国际接轨,我司代理多种知名的国际品牌,如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa,Abnova,GenWay等。
    产品名称:
    T175培养瓶正方斜口带滤膜175cm2Corning.说明书
    英文名称 Corning?175cm2AngledNeckCellCultureFlaskwithVentCap

    单位 5/包,10/
    Corning431080透气培养瓶生长面积(CM275数量/包装5/,20/
    体积750ml
    T175培养瓶正方斜口带滤膜175cm2Corning.说明
    操作步骤:
    1. 样品染色
    1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
    2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
    对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
    3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
    4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
    5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
    2. 样品检测
    1) 流式细胞仪检测:
    染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
    建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
    2) 荧光显微镜检测:
    染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。

    T175培养瓶正方斜口带滤膜175cm2Corning.说明
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    人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38]
    CDK1 Others Human CDC2 Kinase / CDK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
    VERO细胞,非洲绿猴肾细胞 人大细胞肺癌细胞,NCI-H661细胞 CL-0420R 1610(仓鼠肺细胞)5×106cells/瓶×2
    H9c2大鼠心肌细胞(ATCC来源)
    GRN Others Human Granulin / GRN 人细胞裂解液 (阳性对照)
    注意事项:
    1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
    2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
    3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
    4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
    5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。

     

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