荆芥探针法PCR鉴定试剂盒说明书

产品名称：荆芥探针法PCR鉴定试剂盒说明书
英文名称：Herba schizonepetae
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
聚乙二醇8000  PEG 8000  质量规格：>99%,分子生物学级 小鼠S100蛋白(S-100)ELISA检测试剂盒MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit 96T/48T
氯化锂(分子生物学级)  Lithium chloride  质量规格：>98% 人分泌成分(SC)试剂盒 Human secretory compone,SC ELISA Kit
硫酸亚铁铵六水  Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate  质量规格：>99%,BR RatLactoferrin,LTF/LFELISAKit大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
红四氮唑  TTC,TTZ,Tetrazolium Red  质量规格：>98%,BR Chu’sN6完全培养基500毫升溶液/片剂
磺胺甲氧哒嗪  Sulfamethoxypyridazine  质量规格：>98%,BR Mousemucin-5subtypeB,MUC5BELISA试剂盒小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA试剂盒规格：96T/48T
磺胺甲氧哒嗪(标准品)  Sulfamethoxypyridazine  质量规格：分析标准品 小鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA试剂盒 ，英文名： CO ELISA Kit
TCEP；三-(2-甲酰乙基)膦盐酸盐  TCEP; hydrochloride  质量规格：>99%,BR 小鼠可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA检测试剂盒MousesolubleP-selectin,sP-selectinELISAKit 96T/48T
硫代硫酸钠五水(AR)  Sodium thiosulfate, pentahydrate  质量规格：>99%,AR 人肺炎支原体抗体(MP-Ab)试剂盒 Human Mycoplasma pneumoniae aibody,MP-Ab ELISA Kit
化钠(AR)  Sodium iodide  质量规格：>99.5%,AR RatLaminin,LNELISAKit大鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒规格：96T/48T
可溶性淀粉  Starch soluble  质量规格：BR Chymoypsin
荆芥探针法PCR鉴定试剂盒说明书硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐  Thionicotinamide adenine dinucleotidephosphate sodium salt  质量规格：美国进口 英文名称MouseIL-1βELISAKit小鼠白介素1β(IL-1β)规格：96T/48T
烟酸腺嘌呤二核苷钠盐  Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate sodium salt  质量规格：美国进口 英文名称MouseIL-2sRαELISAkit小鼠白介素2可溶性受体α链(CD25)(IL-2sRα)规格：96T/48T
烟酸腺嘌呤二核苷酸钠盐  Nicotinic acid adenine dinucleotide sodium salt  质量规格：美国进口 英文名称MouseIL-2sRβELISAkit小鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)规格：96T/48T
α-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸  α-Nicotinamide adenine dinucleotide  质量规格：美国进口 英文名称MouseinducibleniicoxidesyhaseELISAKIT小鼠诱导型合成酶(iNOS)规格：96T/48T
NAD+, 锂盐  NAD+, Lithium Salt  质量规格：美国进口 英文名称MouseInhibinAELISAKit小鼠抑制素A(INHA)规格：96T/48T
9-甲基-d3-腺嘌呤  9-Methyl-d3 Adenine  质量规格：美国进口 英文名称MouseinhibinBELISAKit小鼠抑制素B(INHB0规格：96T/48T
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷, 缩减环已基铵盐  β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, reduced tetra(cyclohexyl ammonium) salt  质量规格：美国进口 英文名称MouseInsulieceptorβ(ISR-β)ELISAKIT小鼠胰岛素受体β(ISR-β)规格：96T/48T
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷,缩减二钾盐  β-Nicotinamide adenine dinucleotide, reduced dipotassium salt  质量规格：美国进口 英文名称MouseInsulinELISAKit小鼠胰岛素(Insulin)规格：96T/48T
α-烟酰胺腺嘌呤二核苷,缩减二钠盐  α-Nicotinamide adenine dinucleotide, reduced disodium salt  质量规格：美国进口 英文名称MouseInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit小鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)规格：96T/48T
β-NADP-二醛  β-NADP-dialdehyde  质量规格：美国进口 英文名称MouseInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISAKit小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)规格：96T/48T
英文名称MouseIL-1sRⅠ小鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 9-(2',3',5'-三-氧基-苯甲基-β-D-阿糖)腺嘌呤  9-(2',3',5'-Tri-O-benzyl-β-D-arabinofuranosyl)adenine  质量规格：美国进口
英文名称MouseIL-1sRⅡ小鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)规格：96T/48T 红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤盐酸盐  EHNA hydrochloride  质量规格：美国进口
英文名称MouseIL-1sRⅡ小鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)规格：96T/48T 2-氟腺嘌呤  2-Fluoroadenine  质量规格：美国进口
英文名称MouseIL-1β小鼠白介素1β(IL-1β)规格：96T/48T 硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐  Thionicotinamide adenine dinucleotidephosphate sodium salt  质量规格：美国进口
英文名称MouseIL-2sRα小鼠白介素2可溶性受体α链(CD25)(IL-2sRα)规格：96T/48T 烟酸腺嘌呤二核苷钠盐  Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate sodium salt  质量规格：美国进口
英文名称MouseIL-2sRβ小鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)规格：96T/48T 烟酸腺嘌呤二核苷酸钠盐  Nicotinic acid adenine dinucleotide sodium salt  质量规格：美国进口
英文名称Mouseinducibleniicoxidesyhase小鼠诱导型合成酶(iNOS)规格：96T/48T α-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸  α-Nicotinamide adenine dinucleotide  质量规格：美国进口
英文名称MouseInhibinA小鼠抑制素A(INHA)规格：96T/48T NAD+, 锂盐  NAD+, Lithium Salt  质量规格：美国进口
英文名称MouseinhibinB小鼠抑制素B(INHB0规格：96T/48T 9-甲基-d3-腺嘌呤  9-Methyl-d3 Adenine  质量规格：美国进口
英文名称MouseInsulieceptorβ(ISR-β)小鼠胰岛素受体β(ISR-β)规格：96T/48T β-烟酰胺腺嘌呤二核苷, 缩减环已基铵盐  β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, reduced tetra(cyclohexyl ammonium) salt  质量规格：美国进口
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。