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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
29
- 英文名:
Radix gentianae
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
50T
英文名称:Radix gentianae
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
储存条件:
14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括绝对定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
新乌头原碱 HPLC≥98% 20mg 胆红素(Bilirubin)定量检测试剂盒50
乌头原碱 HPLC≥98% 20mg Ratmacrophageinflammatoryprotein3β,MIP-3βELISA试剂盒大鼠巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA试剂盒规格:96T/48T
宋果灵 HPLC≥98% 20mg 小鼠血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
查斯曼宁碱 HPLC≥98% 20mg Rat pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒
去甲乌药碱 HPLC≥98% 20mg Humangalactose-6-sulphatesulphatase,Gal-6SELISAKit 人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
甘露三糖 HPLC≥98% 20mg 包虫抗体IgG(间接法二步法)
伏立康唑 HPLC≥98% 100mg 油菜完全培养基500毫升溶液/片剂
隐色孔雀石绿 HPLC≥98% 100mg Mouseierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit小鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒规格:96T/48T
N甲基荷叶碱 HPLC≥98% 20mg 小鼠血管生成素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA试剂盒 ,英文名: ANGⅡ ELISA Kit
去氢荷叶碱 HPLC≥98% 20mg 小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA检测试剂盒Mousebonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit 96T/48T
龙胆染料法PCR鉴定试剂盒无蛋白酶牛血清白蛋白 Albumin, from bovine Protease free 质量规格:>98%,分子生物学级 钙离子膜通道内质网肌醇1,4,5-三0酸受体(IP3R)功能荧光检测试剂盒20
硬脂酸铝 Aluminum stearate 质量规格:AR 钙离子膜通道内质网利罗丁受体(ryanodinereceptor;RyR)功能荧光检测试剂盒20
铋试剂III(>99%,BR) Bismuth(III) nitrate pentahydrate 质量规格:>99%,BR 钙镁0酸平衡盐(PBS)缓冲溶液500毫升
氢钙二水(>98%,BR) Calcium phosphate, dibasic, dihydrate 质量规格:>98%,BR 钙调蛋白结合检测试剂盒筛选5
碳酸铈 Cerium(III) carbonate, hydrate 质量规格:>99.9%,AR 钙转感受态细菌制备试剂盒1
胰凝乳蛋白酶原 A Chymotrypsinogen A 质量规格:酶活:>1500 U/mg,BC 甘油(glycerol)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20
汽巴蓝 Cibacron blue 3G-A 质量规格:ACS Grade 肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒20
DEAE葡聚糖 DEAE Dextran 质量规格:BR 肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒20
氟啶酮(>98%,植物激素级) Fluridone 质量规格:>98%,植物激素级 肝素(heperin)纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒50
组胺(>98%,BC) Histamine 质量规格:>98%,BC 肝素血液抗凝液100毫升
钙离子膜通道钙交换体(NCX/质膜)功能荧光检测试剂盒20 ADA缓冲液二钠盐(>99%,BR) ADA buffer, disodium salt 质量规格:>99%,BR
钙离子膜通道内质网肌醇1,4,5-三0酸受体(IP3R)功能荧光检测试剂盒20 无蛋白酶牛血清白蛋白 Albumin, from bovine Protease free 质量规格:>98%,分子生物学级
钙离子膜通道内质网利罗丁受体(ryanodinereceptor;RyR)功能荧光检测试剂盒20 硬脂酸铝 Aluminum stearate 质量规格:AR
钙镁0酸平衡盐(PBS)缓冲溶液500毫升 铋试剂III(>99%,BR) Bismuth(III) nitrate pentahydrate 质量规格:>99%,BR
钙调蛋白结合检测试剂盒筛选5 氢钙二水(>98%,BR) Calcium phosphate, dibasic, dihydrate 质量规格:>98%,BR
钙转感受态细菌制备试剂盒1 碳酸铈 Cerium(III) carbonate, hydrate 质量规格:>99.9%,AR
甘油(glycerol)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20 胰凝乳蛋白酶原 A Chymotrypsinogen A 质量规格:酶活:>1500 U/mg,BC
肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒20 汽巴蓝 Cibacron blue 3G-A 质量规格:ACS Grade
肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒20 DEAE葡聚糖 DEAE Dextran 质量规格:BR
肝素(heperin)纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒50 氟啶酮(>98%,植物激素级) Fluridone 质量规格:>98%,植物激素级
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
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文献和实验实时荧光定量 PCR 技术(Quantitative Real-time PCR,简称 qPCR)是在 PCR 扩增过程中,通过实时监测荧光信号的变化,达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断,动物疾病监测,食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延,qPCR 技术更是因其检测通量高,速度快,操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果,我们需要注意哪些方面呢?其实决定一次实验成功
长度可达 20kb,适合于各种 GC 含量的扩增,可用于多种样本的直接 PCR 如植物叶片、全血等。且扩增仅需 30s/kb,甚至于 2kb/s。如此卓越,爱不释手了吧? 4. 选择直接扩增试剂盒对粗品扩增 vazyme 生产的各种直扩试剂盒,直接对粗品进行扩增,大大减少了实验的工作周期。如小鼠基因型鉴定可以直接使用 One Step Mouse Genotyping Kit,全血扩增可以直接使用 Blood Direct PCR Kit V2。
(donor) 和能量受体 (acceptor) 对, 其中供体的发射光谱与受体的吸收光谱重叠,当它们在空间上相互接近到一定距离 (1~10 nm) 时,激发供体而产生的荧光能量正好被附近的受体吸收,使得供体发射的荧光强度衰减,受体荧光分子的荧光强度增强。 图一. 荧光共振能量转移原理图 实时荧光 PCR 技术种类 染料法 SYBR Green I 是一种比较常见的荧光染料,可以非特异的结合双链 DNA 小沟,它可以嵌合进 DNA 双链,但不结合单链。当 SYBR Green I 在溶液
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