- ¥1498
- 泽叶生物
- ZY3021D
- 国产/进口
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Seamless Assembly and Cloning kit
- 保质期：
切勿冻存，有效期24个月
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
长时间储存于4℃
- 规格：
10次
产品介绍：
Seamless Cloning(无缝克隆)技术提供了一种新的、高效快速的基因克隆方法，只要插入的DNA片段末端与载体末端具有15-25个重叠碱基序列就可以在载体的任意位点完成克隆重组.本制品不依赖于T4连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用同源重组的方法，采用特殊的重组酶可以将任意方法线性化后的载体和与其两端具有 15-25bp 重叠区域的PCR片段定向重组，可以快速实现 1-5 个片段的高效无缝克隆。
产品储存：
储存：－20℃ 保存，避免反复冻融。
产品特点：
1.30分钟可以将一个或者多个长、短PCR扩增片段（平端/A端）定向插入载体。
2.不受载体和插入片段酶切位点的可用性和平端/粘性末端的限制，可以在任意位点进行克隆。
3.无缝克隆，插入点不会引入不需要的碱基序列。
4.高效、准确，阳性率＞95% 。
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文献和实验的产物是闭合载体，可以直接进入 Step 4 了。 · Step 4 · 转化感受态细胞或者 RCA 了。还有的产品甚至连后面的聚合酶和连接酶都不需要，克隆效率一样高还能避免填补缺口时的意外错配，强的。 因为整个过程不会引入额外的碱基，可在预定位置精准插入外源片段，因此亦有无缝克隆，无痕克隆的美誉。这个方法还可以实现一步完成多个片段连续组装，只要设计 PCR 引物让相邻片段之间具有 15-30 个碱基的同源序列重叠，就可以实现单管一步反应，完成组装，而且还成功率高，保真度高，能大大减少重复
1. 如何选择合适的限制酶切位点？ 在载体构建实验过程中，限制性酶切位点的选择是决定克隆成功率和后续实是否顺利的关键步骤。选择时需综合考虑载体特性、目的基因序列、酶的反应特性及实验需求，我们可以从以下几个角度分析： ①确保酶切位点在载体和目的基因上均存在且唯一：这是选择的基本要求，避免载体被切成多个片段； ②通过双酶切实现 「定向克隆」，避免反向连接：单酶切可能会导致目的基反向插入载体（该情况会导致表达失败），因此建议优先选择两种不同的限制酶进行双酶切，利用其产生的不同粘性末端（或平末端）实现
菌落生长相对缓慢，可能在 16 h 后 才呈现饱满状态，所以不宜挑选过早，或挑取过大的单克隆菌落；在摇菌培养中，成功重组的阳性菌同样生长较为缓慢，过早混浊的菌液，阳性概率低。 5. 如何高效地进行多位点克隆？ 在实验中有时会遇到多个片段插入或者多个片段拼接的情况。 如果在同一个质粒的不同位置上插入两个或两个以上的片段，一般建议分步将片段插入，即每次在质粒上切开一个位置，插入一个片段。当一个片段构建成功之后，再酶切质粒上另一个位置，插入另一个片段。 如果多个片段要直接通过 Gibson 组装
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